Phospho-RPA32/RPA2 (Ser33) Antibody [H16F6]

目录号: F5040

抗体应用：反应性：Human, Mouse, Rat

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
400-668-6834 info@selleck.cn

使用信息

稀释比例
WB1:1000

抗体应用
WB

反应性
Human, Mouse, Rat

抗体类型
Rabbit Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量实际分子量
29 kDa 32 kDa
^*为什么预测分子量和实际分子量会有不同？以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Phospho-RPA32/RPA2 (Ser33) Antibody [H16F6] 仅识别 Ser33 处磷酸化的内源性 RPA32/RPA2 蛋白水平。

克隆号
H16F6

别名
REPA2; Replication factor A protein 2; RF-A protein 2; RFA2; RP-A p32; RP-A p34; RPA2; RPA32; RPA34

背景
磷酸化RPA32/RPA2 (Ser33) 代表异源三聚体复制蛋白A (RPA) 复合物中32 kDa亚基的检查点激活形式。RPA复合物结合并稳定单链DNA中间体，并通过与DNA以及广泛的修复和检查点蛋白网络相互作用，协调DNA复制、重组和多种DNA修复途径。RPA由RPA1 (70 kDa)、RPA2 (RPA32) 和RPA3 (14 kDa) 组成，其中RPA1具有主要的高亲和力单链DNA结合活性，而RPA32的N端区域富含酸性残基，并含有多个丝氨酸和苏氨酸磷酸化位点，包括Ser33，这些位点作为调控元件，控制蛋白质-蛋白质相互作用以及在受损染色质上的动态重分布。 Ser33 位于该 N 端调控域内，是复制压力和 DNA 损伤期间 PI3K 样激酶 ATR 的直接靶标，其磷酸化发生在损伤反应早期，先于或伴随 ATR、ATM 和 DNA-PK 催化的 RPA32 在 Ser4、Ser8 和 Thr21 的额外磷酸化事件，这些事件共同在停滞的复制叉和 DNA 损伤处产生过度磷酸化的 RPA32 物种。 Ser33位点的磷酸化促进RPA在受损染色质上的积累和离散核内聚集灶的形成，增强ATRIP和ATR激酶通过损伤诱导的K63连接的泛素化途径（以PRP19-CDC5L和RFWD3 E3连接酶为中心）的募集，并促进RAD51和其他修复介质在复制应激位点的后续组装，从而将RPA包裹的单链DNA与ATR检查点激活和同源重组修复偶联起来。Ser33位点磷酸化的RPA32与RPA形成的复合物保持其核心的单链DNA结合功能，但与RAD51、RAD52、XPA、XPG、SMARCAL1和错配修复蛋白等伙伴的亲和力和相互作用谱发生改变，这些改变在复制应激反应期间调节复制叉稳定、重新启动、模板转换和重组介导的重启等途径的选择。 RPA32 的磷酸化受细胞周期调控，在 S 期，细胞周期蛋白依赖性激酶 (CDK) 对 Ser23 和 Ser29 位点进行基础修饰，作为启动事件，使得 DNA 损伤后 Ser33 和 N 端发生过度磷酸化，从而建立了一个将复制状态与 DNA 损伤信号传导能力联系起来的多层控制系统。Ser33 磷酸化的 RPA32 通过支持持续的 ATR 信号传导、CHK1 激活以及在双链断裂或持续存在的复制中间体存在时维持 G2 期阻滞，参与 ATR 依赖的 G2/M 期检查点控制。该磷酸化轴的扰乱会损害检查点的稳健性和基因组稳定性。

背景

磷酸化RPA32/RPA2 (Ser33) 代表异源三聚体复制蛋白A (RPA) 复合物中32 kDa亚基的检查点激活形式。RPA复合物结合并稳定单链DNA中间体，并通过与DNA以及广泛的修复和检查点蛋白网络相互作用，协调DNA复制、重组和多种DNA修复途径。RPA由RPA1 (70 kDa)、RPA2 (RPA32) 和RPA3 (14 kDa) 组成，其中RPA1具有主要的高亲和力单链DNA结合活性，而RPA32的N端区域富含酸性残基，并含有多个丝氨酸和苏氨酸磷酸化位点，包括Ser33，这些位点作为调控元件，控制蛋白质-蛋白质相互作用以及在受损染色质上的动态重分布。 Ser33 位于该 N 端调控域内，是复制压力和 DNA 损伤期间 PI3K 样激酶 ATR 的直接靶标，其磷酸化发生在损伤反应早期，先于或伴随 ATR、ATM 和 DNA-PK 催化的 RPA32 在 Ser4、Ser8 和 Thr21 的额外磷酸化事件，这些事件共同在停滞的复制叉和 DNA 损伤处产生过度磷酸化的 RPA32 物种。 Ser33位点的磷酸化促进RPA在受损染色质上的积累和离散核内聚集灶的形成，增强ATRIP和ATR激酶通过损伤诱导的K63连接的泛素化途径（以PRP19-CDC5L和RFWD3 E3连接酶为中心）的募集，并促进RAD51和其他修复介质在复制应激位点的后续组装，从而将RPA包裹的单链DNA与ATR检查点激活和同源重组修复偶联起来。Ser33位点磷酸化的RPA32与RPA形成的复合物保持其核心的单链DNA结合功能，但与RAD51、RAD52、XPA、XPG、SMARCAL1和错配修复蛋白等伙伴的亲和力和相互作用谱发生改变，这些改变在复制应激反应期间调节复制叉稳定、重新启动、模板转换和重组介导的重启等途径的选择。 RPA32 的磷酸化受细胞周期调控，在 S 期，细胞周期蛋白依赖性激酶 (CDK) 对 Ser23 和 Ser29 位点进行基础修饰，作为启动事件，使得 DNA 损伤后 Ser33 和 N 端发生过度磷酸化，从而建立了一个将复制状态与 DNA 损伤信号传导能力联系起来的多层控制系统。Ser33 磷酸化的 RPA32 通过支持持续的 ATR 信号传导、CHK1 激活以及在双链断裂或持续存在的复制中间体存在时维持 G2 期阻滞，参与 ATR 依赖的 G2/M 期检查点控制。该磷酸化轴的扰乱会损害检查点的稳健性和基因组稳定性。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25499885/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22977173/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%