PREX1 Antibody (Rabbit mAb) [J20N16]
目录号: F7369
抗体应用：
反应性：
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| IHC |
| 反应性 |
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| Human |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
实际分子量
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186 kDa
190 kDa, 110 kDa
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| *为什么预测分子量和实际分子量会有不同？ 以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。 |
| 阳性对照 | Human colon carcinoma; Human lung carcinoma; Human lymphoma; Human melanoma; T-47D cells |
|---|---|
| 阴性对照 | MCF 10A cells |
实验方法
| IHC |
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实验步骤：
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
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生物描述
| 特异性 |
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| PREX1 Antibody (Rabbit mAb) [J20N16] 可检测内源性 PREX1 总蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
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| Q8TCU6 |
| 克隆号 |
|---|
| J20N16 |
| 别名 |
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| KIAA1415, P-Rex1, phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate-dependent Rac exchange factor 1, PIP3 dependent Rac exchange factor 1, PREX1, PtdIns(3,4,5)-dependent Rac exchanger 1 |
| 背景 |
|---|
| PREX1，又称磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸依赖性Rac交换蛋白1，属于Dbl家族的Rho型鸟嘌呤核苷酸交换因子，作为Rac导向的信号整合因子，位于磷脂酰肌醇3-激酶和G蛋白偶联受体的下游。该蛋白包含一个N端Dbl同源催化结构域，该结构域与一个pleckstrin同源结构域配对，后者可感知磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸。PREX1两侧是串联的DEP结构域，C端PDZ和IP4P样区域则组装成调控和效应相互作用，并在双层自身抑制结构中支持长程变构控制。磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸与pleckstrin同源结构域结合，以及Gβγ亚基在特定调控表面的参与，会释放PREX1分子内的分子内限制，暴露Dbl同源活性位点，并允许Rac家族GTP酶上高效的GDP-GTP交换，从而提高Rac-GTP水平，并将受体输入与核心Rho GTP酶网络偶联。激活的Rac随后将PREX1的输出与下游效应分子（例如p21激活的激酶和其他Rac响应性激酶）连接起来，这些效应分子重塑肌动蛋白细胞骨架、调节伪足动力学并调整黏附复合物，使PREX1成为G蛋白偶联受体和受体酪氨酸激酶信号汇聚的背景下，定向迁移、侵袭和细胞-基质相互作用的核心调控因子。全长PREX1的结构分析表明，其催化模块以自身抑制构象与远端结构域紧密结合，脂质和Gβγ的协同结合诱导分子两层发生显著的构象重排，使Dbl同源结构域与Rac底物对齐，并在质膜上稳定活性信号构象。PREX1驱动的Rac激活参与连接ERK信号通路和其他促有丝分裂级联反应的通路，使该交换因子除了参与细胞运动外，还参与增殖和存活的调控，并将其置于整合趋化因子受体、鞘氨醇-1-磷酸受体和生长因子受体的更广泛的信号通路中。 PREX1 表达和激活的升高与乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤和胶质母细胞瘤等癌症的侵袭行为和转移潜能增加有关，在这些癌症中，PREX1-Rac 信号传导塑造细胞骨架组织、定向迁移和基质侵袭，并且 Rac 依赖性激酶的输出参与支持肿瘤进展的转录程序。 |
| 参考文献 |
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