PRMT7 Antibody (Rabbit mAb) [F2F1]
目录号: F8277
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: HepG2, Lane 2: Hela, Lane 3: 293, Lane 4: MCF7
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IP |
| 反应性 |
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| Human |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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78 kDa
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| 阳性对照 | HepG2 cells; HeLa cells; 293 cells; MCF7 cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:2000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| PRMT7 Antibody (Rabbit mAb) [F2F1] 可检测内源性 PRMT7 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞质，细胞核 |
| Uniprot ID |
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| Q9NVM4 |
| 克隆号 |
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| F2F1 |
| 别名 |
|---|
| KIAA1933, PRMT7, Protein arginine N-methyltransferase 7, Histone-arginine N-methyltransferase PRMT7, [Myelin basic protein]-arginine N-methyltransferase PRMT7 |
| 背景 |
|---|
| PRMT7 是一种 III 型蛋白精氨酸甲基转移酶，主要催化组蛋白和非组蛋白底物上精氨酸残基的单甲基化，并通过直接修饰染色质和与其他 PRMT（尤其是 PRMT5）的相互作用，发挥基因表达、干性、应激反应和神经肌肉发育的多效性调控作用。该酶由一个重复的 PRMT 核心构成，包含两个串联排列的 AdoMet 结合域，但只有一个催化位点具有活性，这赋予了 PRMT 家族独特的底物特异性和动力学特性，并促进 MMA 的生成，而 MMA 可进一步被 PRMT5 转化为对称二甲基精氨酸。 PRMT7 甲基化组蛋白和 snRNP 蛋白中富含甘氨酸-精氨酸序列的精氨酸残基，并通过激活 PRMT5 或产生启动性 MMA 状态间接促进 H4R3me2 和 Sm 蛋白 SDMA 的生成，从而影响染色质可及性、snRNP 核心组装和 RNA 加工能力。在染色质层面，PRMT7 依赖的 H4R3 对称二甲基化与 DNA 损伤修复基因（如 APEX2、POLD1 和 POLD2）的抑制以及对神经元特异性启动子处 MLL4 介导的 H3K4 甲基化的拮抗作用相关，这表明 PRMT7 是部分修复通路和神经元分化程序的负调控因子。 PRMT7在胚胎干细胞、生殖细胞和多种癌症干细胞群中富集，其活性通过抑制分化促进位点、调节miRNA网络（例如miR-24-2簇）以及维持SDMA标记的染色质和RNA结合蛋白的适当水平来支持细胞的自我更新和干性。在癌症模型中，PRMT7表达的改变会影响细胞增殖、迁移和应激耐受性：PRMT7过表达促进肿瘤在基因毒性或代谢应激下的生长和存活，而PRMT7敲低则降低克隆形成能力、诱导G1期阻滞和分化，并使细胞对DNA损伤剂更加敏感。这使得人们对PRMT7作为药物靶点的兴趣日益浓厚，并且近期已发现具有明确结合模式的PRMT7/9双重抑制剂。 |
| 参考文献 |
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