Proglucagon Antibody [M22K5]
目录号: F0810
抗体应用：
反应性：
-
Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded mouse pancreas tissue with F0810 at 1:400 dilution. -
Immunofluorescent analysis of Mouse pancreatic tissue using F0810 (green, 1:400), Hoechst (blue) and tubulin (Red).
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| IHC, IF |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
| 阳性对照 | Human pancreas; Rat pancreas; Mouse pancreas |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| IF |
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实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
通透
1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。
（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。
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| IHC |
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实验步骤：
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| Proglucagon Antibody [M22K5] 可检测内源性 Proglucagon 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞外环境 |
| Uniprot ID |
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| P01275 |
| 克隆号 |
|---|
| M22K5 |
| 别名 |
|---|
| Pro-glucagon;GCG |
| 背景 |
|---|
| 胰高血糖素原由Gcg基因编码，是一种前体多肽，是多种肽类激素的来源，这些激素在代谢和肠道功能中发挥重要作用。它以单链蛋白的形式合成，约含158-160个氨基酸，胰高血糖素序列位于其内部，两侧是含有其他生物活性肽结构域的N端和C端区域。在胰腺α细胞中，胰高血糖素原在成对碱性残基处经前激素转化酶2 (PC2) 的蛋白水解切割，生成成熟的胰高血糖素，这是一种由29个氨基酸组成的肽，可激活肝细胞上的胰高血糖素受体，并通过cAMP-PKA信号通路刺激糖原分解和糖异生。在肠道L细胞和某些脑干神经元中，同一种前体经前激素转化酶1/3 (PC1/3) 加工生成胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)、胰高血糖素样肽-2 (GLP-2)、胃泌素调节素和胰高血糖素，每种肽都与不同的受体和下游通路结合。GLP-1作用于胰腺β细胞和中枢神经系统中的GLP-1受体，增强葡萄糖依赖性胰岛素分泌，抑制胰高血糖素释放，延缓胃排空，并促进饱腹感；而GLP-2则通过肠道上皮细胞和上皮下细胞上的GLP-2受体发出信号，支持黏膜生长和屏障完整性。PC2和PC1/3的组织特异性表达决定了胰腺和肠道中哪种肽类产物占主导地位，从而塑造了胰高血糖素驱动的分解代谢与GLP-1介导的合成代谢和肠道保护作用之间的平衡。胰高血糖素原加工或肽分泌失调会导致代谢性疾病，因为 α 细胞中胰高血糖素释放不当会加剧空腹和餐后高血糖，而肠胰轴中 GLP-1 分泌或受体反应性降低与血糖控制受损和体重增加有关。 |
| 参考文献 |
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