Protein A Antibody [B17N6]
目录号: F4409
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Recombinant Alkalitolerant Protein A
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| IP, IF, ELISA |
| 反应性 |
|---|
| Staphylococcus aureus |
| 抗体类型 |
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| Mouse Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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~42 kDa
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| 阳性对照 | Protein A from Staphylococcus aureus |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| IF |
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实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
通透
1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。
（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| Protein A Antibody [B17N6] 可检测内源性 Protein A 总蛋白水平。 |
| 克隆号 |
|---|
| B17N6 |
| 背景 |
|---|
| 蛋白A (SpA) 是金黄色葡萄球菌的主要表面毒力因子，属于免疫球蛋白结合蛋白家族。它表达于细菌细胞壁上，具有多个串联的IgG结合域。SpA对人、兔和其他哺乳动物的IgG Fc区具有高亲和力，但对小鼠IgG1的亲和力较低。这种相互作用使SpA能够通过结合IgG的Fcγ结构域干扰宿主的免疫防御，阻断Fab臂对细菌表面的调理作用，从而阻止中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬作用。因此，金黄色葡萄球菌能够在血流感染中逃避免疫清除。SpA还能作为B细胞超抗原，通过交联使用VH3家族Fab的B细胞受体，导致广泛的多克隆B细胞扩增和随后的细胞凋亡。这种蛋白通过删除B-1细胞和边缘区B细胞来削弱适应性免疫，导致体液免疫长期缺陷并促进复发感染。该蛋白通过磷脂酶C、蛋白激酶C (PKC) 和MAP激酶激活酪氨酸激酶信号通路，导致B细胞异常增殖，最终被删除。由于其保守的Fc结合位点，SpA广泛用于亲和层析法纯化抗体，以及在Western印迹、放射免疫分析(RIA)和免疫沉淀等检测中发挥作用。单克隆抗SpA IgG1抗体用于检测和定量SpA标记的融合蛋白和金黄色葡萄球菌。SpA表达失调是导致慢性感染和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染的重要因素。 |
| 参考文献 |
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