PSRC2 Antibody (Rabbit mAb) [L8L24]
目录号: F9179
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: HeLa, Lane 2: 293T
操作要点
WB
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
湿转参考条件：250 mA, 180 min。
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
湿转参考条件：250 mA, 180 min。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB |
| 反应性 |
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| Mouse, Rat, Human |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
实际分子量
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226 kDa
260 kDa
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| *为什么预测分子量和实际分子量会有不同？ 以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。 |
| 阳性对照 | Mouse testis tissue; Mouse lymph node tissue; Rat thymus tissue; HeLa cells; 293T cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：250 mA, 180 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| PSRC2 Antibody (Rabbit mAb) [L8L24] 可检测内源性 PSRC2 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞核 |
| Uniprot ID |
|---|
| O60293 |
| 克隆号 |
|---|
| L8L24 |
| 别名 |
|---|
| CCDC131, KIAA0546, PSRC2, ZFC3H1 |
| 背景 |
|---|
| PSRC2，现正式基因符号为ZFC3H1，曾用名CCDC131、CSRC2和KIAA0546，编码一种大型含锌指结构的蛋白质。尽管其名称中包含锌指结构，但它并非经典的DNA结合转录因子，而是作为哺乳动物核RNA外泌体监视网络中的核心衔接蛋白发挥作用。该蛋白的N端带有锌指结构基序，并具有延伸的、主要由卷曲螺旋构成的支架结构，该结构介导蛋白质-蛋白质组装而非催化活性，在多亚基RNA降解机制中发挥结构桥梁的作用，而非作为酶亚基本身。ZFC3H1与RNA解旋酶MTR4配对形成紧密的核心异二聚体，构成poly(A)尾外泌体靶向连接（PAXT）。PAXT通路不同于由MTR4、ZCCHC8和RBM7组成的三聚体核外泌体靶向复合物，但功能上与之平行。核外泌体靶向复合物识别短的、早期的、基本未经加工的RNA，例如启动子上游转录本和增强子RNA；而PAXT连接则指向更长的、经过更广泛聚腺苷酸化和加工的核转录本，这种特异性是通过MTR4-ZFC3H1二聚体与核内聚腺苷酸结合蛋白PABPN1之间RNA依赖性的相互作用实现的。ZFC3H1或PABPN1的缺失会导致包含编码和非编码转录本的共同底物RNA群的积累，这证实了这两个因子在同一降解分支中发挥作用，而不是独立发挥作用。ZFC3H1驱动聚腺苷酸化的外泌体底物物理隔离到离散的核灶中，这些核灶在空间上与卡哈尔小体、核斑、副核斑和核仁截然不同，而这种滞留活性本身是核灶形成所必需的。当ZFC3H1缺失时，原本会被标记为核降解的转录本会通过依赖于mRNA输出因子AlyREF的途径输出到细胞质中，这表明PAXT介导的核滞留通常与核质输出机制直接竞争，以防止转录本过早逃逸。这种外泌体募集和物理核锚定的双重能力决定了哪些加工后的RNA会在细胞核内被清除，哪些会被允许进入细胞质，从而直接影响非编码RNA的周转、转录噪声的清除以及核RNA质量控制的准确性。 |
| 参考文献 |
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