Rubella Virus capsid Antibody (Mouse mAb) [M17H6]
目录号: F4902
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: recombinant purified rubella capsid protein, Lane 2: irrelevant viral proteins
操作要点
WB
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, ELISA |
| 反应性 |
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| Rubella virus |
| 抗体类型 |
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| Mouse Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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115 kDa
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实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
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| Rubella Virus capsid Antibody (Mouse mAb) [M17H6] 可检测外源性 Rubella Virus capsid 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
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| 衣壳蛋白，宿主细胞质，宿主高尔基体，宿主膜，宿主线粒体，T=4二十面体衣壳蛋白 |
| Uniprot ID |
|---|
| P07566 |
| 克隆号 |
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| M17H6 |
| 别名 |
|---|
| Structural polyprotein, p110, Structural polyprotein, p110 |
| 背景 |
|---|
| 风疹病毒衣壳蛋白是风疹病毒属中唯一的衣壳蛋白，作为核心结构组分，负责包装正链RNA基因组，并在细胞内膜上组织病毒颗粒的组装。该蛋白包含一个N端结构域，形成具有独特折叠结构的衣壳原体，这种折叠结构在其他病毒衣壳中并不常见；此外，它还包含一个较为灵活的C端片段，该片段携带对RNA结合和与病毒包膜糖蛋白相互作用至关重要的碱性元件和膜近端元件。衣壳蛋白结合基因组RNA形成核糖核蛋白核心，并与高尔基体衍生膜上的E1-E2糖蛋白复合物结合。在高尔基体衍生膜上，衣壳蛋白的结构域与糖蛋白胞质尾部的协同相互作用驱动病毒出芽，并生成具有特定核心几何结构的包膜病毒颗粒。病毒颗粒内衣壳原体的三维排列支持二十面体有序核心的形成，该核心能够稳定RNA，将其定位在包膜上，并有助于在细胞外传播过程中维持颗粒的整体完整性。衣壳还通过与影响翻译和先天防御途径的宿主因子相互作用参与病毒-宿主通讯，包括与细胞多聚腺苷酸结合蛋白的相互作用，后者能够调节宿主翻译并促进病毒基因表达。衣壳中特定残基的磷酸化调节RNA结合能力和核衣壳组装，从而增加了一层翻译后调控，将衣壳-RNA相互作用与病毒颗粒形成的时间和效率联系起来。在风疹病毒的生命周期中，衣壳与非结构复制酶组分和包膜蛋白协同作用，协调复制复合物的活性、核衣壳的形成和出芽，使其处于基因组复制和颗粒形态发生之间的关键节点。在受感染的组织中，衣壳有助于病毒 RNA 的持续存在和感染性病毒颗粒的维持，这一特性与风疹病毒的致畸潜力以及在妊娠早期感染时发生的先天性风疹综合征的发病机制有关。 |
| 参考文献 |
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