SGK1 Antibody (Rabbit mAb) [A6H22]

目录号: F9390

抗体应用：反应性：Mouse, Human

Lane 1: A431, Lane 2: NIH/3T3

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
400-668-6834 info@selleck.cn

使用信息

稀释比例
WB1:500 FCM1:30

抗体应用
WB, FCM

反应性
Mouse, Human

抗体类型
Rabbit Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量实际分子量
49 kDa 57 kDa
^*为什么预测分子量和实际分子量会有不同？以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。

阳性对照	Human kidney carcinoma tissue; HEK293 cells; NIH3T3 cells; A431 cells
阴性对照

实验方法

WB
实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:500），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:500），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
SGK1 Antibody (Rabbit mAb) [A6H22] 可检测内源性 SGK1 总蛋白水平。

蛋白定位
细胞膜，细胞质，内质网，内膜系统，线粒体，细胞核

Uniprot ID
O00141

克隆号
A6H22

别名
SGK, SGK1, Serine/threonine-protein kinase Sgk1, Serum/glucocorticoid-regulated kinase 1

背景
SGK1，即血清和糖皮质激素调节激酶1，是一种AGC家族丝氨酸/苏氨酸激酶，作为PI3K信号通路的下游效应分子，在多种组织中参与离子转运、代谢、存活和免疫调节的应激反应调控。该蛋白包含一个N端调控区（具有疏水基序和磷脂酰肌醇结合元件）和一个C端激酶结构域。C端激酶结构域在结构和功能上与AKT相似，但在底物谱和调控输入方面存在差异，这使得SGK1成为PI3K信号通路中一个不依赖于AKT的分支。激活过程遵循一系列磷酸化级联反应，其中 mTORC2 磷酸化 Ser422 位点的疏水基序，形成 PDK1 的结合位点。PDK1 随后磷酸化激酶结构域内的激活环苏氨酸残基，打开 ATP 结合位点，从而产生具有催化活性的激酶，该激酶能够动态响应细胞外刺激，例如糖皮质激素、生长因子和渗透压应激。激活后，SGK1 可磷酸化多种膜和胞质底物，包括离子通道（例如 ENaC 和各种 K⁺ 和 Ca²⁺ 通道）、Na⁺/K⁺-ATP 酶、氨基酸转运蛋白和 Na⁺ 偶联葡萄糖转运蛋白，从而促进钠重吸收、营养物质摄取、糖酵解、血管生成以及细胞在应激条件下的存活。 SGK1还能磷酸化并调节WNK/SPAK/OSR1网络的部分组分，从而与肾脏电解质处理和血压的协同调节相关；SGK1活性失调会增强ENaC依赖的Na⁺潴留，并导致高血压和盐敏感性心血管疾病。在信号通路层面，SGK1与AKT共同参与PI3K/mTOR通路，但在某些情况下可以替代或补充AKT的功能。已验证的SGK1特异性靶点包括FOXO3a、GSK3β和NDRG1，并且有证据表明，即使AKT受到抑制，SGK1仍能促进肿瘤细胞的存活、迁移和治疗耐药性。在癌症中，SGK1 经常上调或过度激活，通过维持 mTORC1 活性、增强葡萄糖和氨基酸摄取、稳定 HIF-1α 以及调节 NF-κB 和其他转录程序，促进细胞增殖、上皮-间质转化、侵袭和化疗耐药，使其成为肿瘤学中一个新兴的靶点，与 AKT 有区别但又互补。SGK1 还作为免疫和纤维化反应的调节因子：它影响 T 细胞分化和 Th17/Treg 平衡，调节巨噬细胞功能，并通过影响炎症信号传导和成纤维细胞活化，促进慢性移植物抗宿主病和器官纤维化。在神经系统疾病中，SGK1 的表达和活性在抑郁症、神经退行性疾病和缺血性损伤中发生改变，其在神经元存活、突触功能和应激反应中的作用进一步拓展了其生理意义。

背景

SGK1，即血清和糖皮质激素调节激酶1，是一种AGC家族丝氨酸/苏氨酸激酶，作为PI3K信号通路的下游效应分子，在多种组织中参与离子转运、代谢、存活和免疫调节的应激反应调控。该蛋白包含一个N端调控区（具有疏水基序和磷脂酰肌醇结合元件）和一个C端激酶结构域。C端激酶结构域在结构和功能上与AKT相似，但在底物谱和调控输入方面存在差异，这使得SGK1成为PI3K信号通路中一个不依赖于AKT的分支。激活过程遵循一系列磷酸化级联反应，其中 mTORC2 磷酸化 Ser422 位点的疏水基序，形成 PDK1 的结合位点。PDK1 随后磷酸化激酶结构域内的激活环苏氨酸残基，打开 ATP 结合位点，从而产生具有催化活性的激酶，该激酶能够动态响应细胞外刺激，例如糖皮质激素、生长因子和渗透压应激。激活后，SGK1 可磷酸化多种膜和胞质底物，包括离子通道（例如 ENaC 和各种 K⁺ 和 Ca²⁺ 通道）、Na⁺/K⁺-ATP 酶、氨基酸转运蛋白和 Na⁺ 偶联葡萄糖转运蛋白，从而促进钠重吸收、营养物质摄取、糖酵解、血管生成以及细胞在应激条件下的存活。 SGK1还能磷酸化并调节WNK/SPAK/OSR1网络的部分组分，从而与肾脏电解质处理和血压的协同调节相关；SGK1活性失调会增强ENaC依赖的Na⁺潴留，并导致高血压和盐敏感性心血管疾病。在信号通路层面，SGK1与AKT共同参与PI3K/mTOR通路，但在某些情况下可以替代或补充AKT的功能。已验证的SGK1特异性靶点包括FOXO3a、GSK3β和NDRG1，并且有证据表明，即使AKT受到抑制，SGK1仍能促进肿瘤细胞的存活、迁移和治疗耐药性。在癌症中，SGK1 经常上调或过度激活，通过维持 mTORC1 活性、增强葡萄糖和氨基酸摄取、稳定 HIF-1α 以及调节 NF-κB 和其他转录程序，促进细胞增殖、上皮-间质转化、侵袭和化疗耐药，使其成为肿瘤学中一个新兴的靶点，与 AKT 有区别但又互补。SGK1 还作为免疫和纤维化反应的调节因子：它影响 T 细胞分化和 Th17/Treg 平衡，调节巨噬细胞功能，并通过影响炎症信号传导和成纤维细胞活化，促进慢性移植物抗宿主病和器官纤维化。在神经系统疾病中，SGK1 的表达和活性在抑郁症、神经退行性疾病和缺血性损伤中发生改变，其在神经元存活、突触功能和应激反应中的作用进一步拓展了其生理意义。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28236975/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32728395/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%