SOCS2 Antibody (Rabbit mAb) [H21H24]
目录号: F7603
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: NCCIT, Lane 2: K562, Lane 3: 293T
操作要点
WB
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IP, IF, FCM |
| 反应性 |
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| Human |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
实际分子量
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22 kDa
22 kDa
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| *为什么预测分子量和实际分子量会有不同？ 以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。 |
| 阳性对照 | NCCIT cells; HeLa cells; MCF7 cells; K-562 cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:2000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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| IF |
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实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
通透
1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。
（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| SOCS2 Antibody (Rabbit mAb) [H21H24] 可检测内源性 SOCS2 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞质 |
| Uniprot ID |
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| O14508 |
| 克隆号 |
|---|
| H21H24 |
| 别名 |
|---|
| CIS2, SSI2, STATI2, SOCS2, Suppressor of cytokine signaling 2, SOCS-2, Cytokine-inducible SH2 protein 2, STAT-induced STAT inhibitor 2, CIS-2, SSI-2 |
| 背景 |
|---|
| SOCS2是细胞因子诱导型细胞因子信号抑制因子家族成员，作为Cullin-5-RING E3泛素连接酶（ECS/CRL5）复合物的底物识别亚基发挥作用。它通过靶向激活的细胞因子和生长激素受体进行泛素依赖性降解，从而负调控JAK-STAT信号通路。该蛋白包含一个中央SH2结构域，可结合配体激活的受体或相关激酶上的磷酸酪氨酸基序；以及一个C端SOCS盒，可募集Elongin B/C、Cullin-5和Rbx2组装成功能性泛素连接酶，从而构建一个模块化结构，将磷酸依赖性底物识别与蛋白酶体降解偶联起来。在生长激素信号通路中，SOCS2受生长激素（GH）强烈诱导，并通过其SH2结构域与JAK2激活后生长激素受体胞内尾部的磷酸化酪氨酸残基结合；组装的ECS(SOCS2)复合物泛素化GHR，促进其内吞和降解，形成一个反馈环路，限制受体数量，抑制下游STAT5激活，并调控IGF-1相关的体细胞生长。同样，SOCS2识别JAK2磷酸化的促红细胞生成素受体，催化其泛素化和蛋白酶体降解，减弱促红细胞生成素诱导的JAK-STAT信号通路，并参与调控红系细胞的增殖和存活。对SOCS2-elongin C-elongin B复合物的结构研究表明，SH2结构域和SOCS盒如何定位以容纳磷酸肽底物，同时保持与Elongin BC-Cullin-5模块的稳定结合，从而阐明了底物结合和连接酶组装如何整合到一个紧凑的支架中，该支架指导CRL5的特异性。除了GH和EPO通路外，SOCS2还能结合IGF-1受体和其他细胞因子受体。综述数据表明，SOCS2调节代谢、中枢神经系统功能、免疫反应和乳腺生物学中的多个JAK-STAT依赖性网络，因此SOCS2的水平和活性通过控制受体密度和信号强度影响多种生理过程。 SOCS2 失调——通过功能丧失突变、表达改变或翻译后修饰紊乱——与通过增强 GH/IGF-1 信号传导、巨噬细胞对 Toll 样受体配体的炎症反应增强而导致的体细胞异常生长有关，并且与癌症、胰岛素抵抗和心血管疾病有关，这与其作为细胞因子和生长因子信号传导的中心刹车的作用相一致。 |
| 参考文献 |
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