TGF β Receptor II Antibody (Rabbit mAb) [L17N10]
目录号: F8251
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: HT1080
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB |
| 反应性 |
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| Human |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
实际分子量
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65 kDa
66-95 kDa
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| *为什么预测分子量和实际分子量会有不同？ 以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。 |
| 阳性对照 | HepG2 cells; HT-1080 cells; A549 cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:5000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| TGF β Receptor II Antibody (Rabbit mAb) [L17N10] 可检测内源性 TGF β Receptor II 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞膜，内膜系统，细胞外环境 |
| Uniprot ID |
|---|
| P37173 |
| 克隆号 |
|---|
| L17N10 |
| 别名 |
|---|
| TGF-beta receptor type-2, TGFR-2, TGF-beta type II receptor, Transforming growth factor-beta receptor type II, TGF-beta receptor type II, TbetaR-II, TGFBR2 |
| 背景 |
|---|
| TGF-β 受体 II (TGFBR2) 是 TGF-β 受体亚家族的跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶，它与 TGF-β 受体 I (TGFBR1) 一起形成二聚体细胞因子 TGF-β1、TGF-β2 和 TGF-β3 的高亲和力信号复合物，并作为组成型活性上游激酶启动经典和非经典 TGF-β 信号级联。该受体具有一个N端胞外配体结合域，其结构紧凑，呈三指毒素样折叠，由九个β折叠链和一个单螺旋组成，并由六个链内二硫键稳定。N端为跨膜区段，C端为胞质激酶结构域。高分辨率晶体结构显示，细长的第一“指”以及特定的表面电荷和疏水模式，形成了皮摩尔级亲和力的TGF-β配体二聚体结合位点。配体结合驱动异源四聚体信号复合物的组装，该复合物包含两个TGFBR2分子和两个TGFBR1分子，它们对称地结合在细胞因子二聚体上。在该复合物中，组成型活性TGFBR2激酶对TGFBR1的GS结构域进行反式磷酸化，激活其催化活性，从而触发下游信号通路。经典信号通路启动时，激活的TGFBR1磷酸化受体调节的Smad蛋白（R-Smads），例如Smad2和Smad3的C端SSXS基序，促进其与受体解离并与共同介质Smad4结合；Smad2/3-Smad4复合物随后在细胞核内积累，与DNA结合并与其他转录因子协同作用，调节TGF-β反应基因的表达，这些基因参与细胞周期阻滞、分化、细胞外基质生成、免疫抑制和组织修复。除了这种Smad依赖性通路外，含TGFBR2的复合物还可以激活非经典通路，包括p38 MAPK、ERK、JNK、Rho GTP酶和PI3K/AKT信号通路，从而根据细胞类型和环境的不同，提供调节细胞骨架组织、迁移、存活和代谢反应的替代通路。 TGFBR2 的异构体多样性是由选择性剪接产生的，包括胞外或胞质片段不同的变体；已报道的异构体可以高亲和力地结合 TGF-β 配体，并支持 Smad 的完全激活，或者作为配体陷阱隔离 TGF-β1、TGF-β2 和 TGF-β3，不允许 Smad2/3 磷酸化，从而减弱受体水平的经典信号传导。 TGFBR2 突变在微卫星不稳定的结直肠癌和胃癌中很常见，并且与肿瘤抑制性 TGF-β 反应的丧失有关，而种系 TGFBR2 变异是遗传性结缔组织和血管疾病（如 Loeys-Dietz 主动脉瘤综合征）的基础，并且与马凡氏综合征样表型和遗传性出血性毛细血管扩张症有关，反映了该受体在血管和细胞外基质稳态中的核心作用。 |
| 参考文献 |
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