TMEM119 (Microglial Marker) Antibody (Rabbit mAb) [H12P23]
目录号: F1546
抗体应用：
反应性：
-
Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded mouse kidney tissue with F1546 at 1:200 dilution.
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| IHC |
| 反应性 |
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| Mouse |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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29 kDa
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| 阳性对照 | Mouse cerebrum tissue; Mouse corpus callosum tissue; Normal mouse brain tissue |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| IHC |
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实验步骤：
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
TMEM119 (Microglial Marker) Antibody (Rabbit mAb) [H12P23] 可检测内源性 TMEM119 (Microglial Marker) 总蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q4V9L6 |
| 克隆号 |
|---|
| H12P23 |
| 别名 |
|---|
| Transmembrane protein 119, Osteoblast induction factor, OBIF, Tmem119 |
| 背景 |
|---|
TMEM119 是一种 I 型跨膜蛋白，其酶活性未知，在脑实质小胶质细胞中高度富集，并已成为中枢神经系统驻留小胶质细胞的可靠标志物。在许多生理和病理情况下，TMEM119 有助于区分卵黄囊来源的小胶质细胞和浸润的血源性巨噬细胞。该蛋白包含一个腔内/胞外 N 端区域、一个跨膜区段和一个短的胞质尾，其表达主要局限于脑实质内的小胶质细胞，在神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞和大多数外周髓系细胞中表达极低或不表达。因此，TMEM119 可作为免疫组织化学、流式细胞术和转录组学靶向分析中相对特异性的小胶质细胞表面标志物。比较小胶质细胞转录组分析发现，TMEM119 是一种保守的小胶质细胞特征基因，其 mRNA 和蛋白质在静息状态和经典激活状态下的稳定性高于其他一些标记物。TMEM119 免疫反应性标记人类神经退行性脑中的 IBA1⁺CD68⁺ 小胶质细胞，而对浸润多发性硬化病变或梗死的 IBA1⁺ 巨噬细胞的标记较少或无法标记，这支持了将其用于区分人类组织中的驻留小胶质细胞和募集的单核细胞衍生巨噬细胞。 TMEM119的表达随小胶质细胞的激活状态和解剖位置而变化：创伤性脑损伤、实验性脱髓鞘、缺血以及其他急性或慢性损伤通常伴有小胶质细胞中TMEM119信号的降低，这些小胶质细胞呈现变形虫样或DAM样表型。TMEM119蛋白在病灶核心和斑块周围区域尤其减少，而在更远端或激活程度较低的小胶质细胞群中则保留得更好，这表明TMEM119是稳态小胶质细胞的标志，并随着小胶质细胞向强反应状态转变而下调。最近的研究表明，TMEM119可以结合β-淀粉样蛋白寡聚体，参与低密度脂蛋白受体家族成员（如LRP1）的募集，并影响阿尔茨海默病模型中淀粉样蛋白的清除和小胶质细胞的吞噬能力，这提示TMEM119除了作为标志物外，还在小胶质细胞处理聚集蛋白方面发挥功能性作用。在某些阿尔茨海默病患者的脑组织中，TMEM119 mRNA水平升高，而其蛋白水平则表现出区域和环境依赖性变化。此外，TMEM119阳性的小胶质细胞与经典的M1或M2极化标志物并不一致，这使得TMEM119成为小胶质细胞谱系和稳态特性的标志物，而非简单的激活状态标志物。已有报道称，在特定条件下，TMEM119在中枢神经系统以外的某些外周细胞类型中也有表达。TMEM119在高度应激或疾病相关的小胶质细胞中表达下调，因此其特异性和敏感性取决于疾病模型和时间点；当使用TMEM119启动子驱动的报告基因系或基于抗体的定量方法来定义或分离小胶质细胞群时，这些特性至关重要。 |
| 参考文献 |
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