VAP1 Antibody (Rat mAb) [G15D13]
目录号: F3800
抗体应用：
反应性：
-
Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded mouse lung tissue with F3800 at 1:50 dilution.
操作要点
本抗体需使用抗大鼠二抗。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
|---|
| IHC |
| 反应性 |
|---|
| Mouse |
| 抗体类型 |
|---|
| Rat Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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85 kDa
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| 阳性对照 | Mouse muscle tissue |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| IF |
|---|
实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
通透
1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。
（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
VAP1 Antibody (Rat mAb) [G15D13] 可检测内源性 VAP1 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞膜，内膜系统 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q16853 |
| 克隆号 |
|---|
| G15D13 |
| 别名 |
|---|
| Vap1, Amine oxidase [copper-containing] 3, Amine oxidase copper-containing 3, Copper amine oxidase, Semicarbazide-sensitive amine oxidase, Vascular adhesion protein 1, SSAO, VAP-1 |
| 背景 |
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VAP-1，又称氨基脲敏感性胺氧化酶，由AOC3基因编码，属于含铜胺氧化酶家族，是一种具有双重功能的内皮分子，它既具有胺氧化酶的催化活性，又可作为诱导型白细胞黏附受体发挥作用。该酶催化伯胺（包括内源性底物甲胺和氨基丙酮）的氧化脱氨反应，将其转化为相应的醛，同时释放过氧化氢和氨作为反应副产物；其催化作用依赖于铜离子和蛋白质衍生的托帕醌辅因子，这使得VAP-1在结构和机制上与黄素依赖性线粒体单胺氧化酶MAO-A和MAO-B有所区别，尽管二者在酶分类上存在重叠。利用模型底物苄胺进行的稳态动力学分析揭示了周转率的钟形pH依赖性，该依赖性由酶-底物复合物内的两个宏观可电离基团决定，表明催化需要特定的质子化状态，该状态由胺周转过程中位于活性位点的残基维持。VAP-1以膜结合形式存在于血管内皮细胞和血管平滑肌细胞表面，也以可溶性循环形式存在，后者是通过金属蛋白酶介导的膜锚定蛋白的蛋白水解脱落产生的。膜结合型VAP-1的表达在血管炎症部位特异性上调。作为一种黏附分子，VAP-1介导白细胞在高内皮静脉和炎症血管中黏附级联反应的慢速滚动和牢固黏附步骤，促进淋巴细胞、单核细胞和粒细胞与内皮表面结合，为它们迁移至组织做好准备。尽管VAP-1和胺氧化酶活性均由同一蛋白介导，但其作用机制与VAP-1的胺氧化酶活性截然不同。在血管平滑肌细胞中，VAP-1对氨基丙酮和甲胺的酶活性会生成细胞毒性醛类产物，并导致血管壁氧化应激，这使得VAP-1的病理意义不仅限于白细胞募集，还能在动脉粥样硬化过程中直接损伤血管组织。 VAP-1 与动脉粥样硬化性心血管疾病（包括中风和冠状动脉疾病）的慢性炎症成分有关，它通过促进免疫细胞浸润血管壁和氧化修饰血管组织发挥作用。小鼠中 AOC3 的基因缺失会减少白细胞浸润脂肪组织，从而在代谢和血管炎症模型中将 VAP-1 活性与组织特异性免疫细胞募集直接联系起来。 |
| 参考文献 |
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