Mouse CD11b Cell lsolation Kit

实验前准备

缓冲液配制： PBS缓冲液（pH 7.2）包括0.5%的BSA和2 mM EDTA，需预先通过0.22 μm滤膜过滤除菌。

实验步骤

1. 细胞准备：
用1mL的注射器吸取适量的1×PBS，从骨腔两端反复冲洗骨腔，直到将其中的骨髓完全洗出，收集细胞悬液于50ml离心管中，300 g，离心3 min。
离心完成后，弃上清，加入10 ml ACK红细胞裂解液，室温裂解10 min，再加入10 mL PBS，300 g，离心3 min。
离心完成后，弃上清，将骨髓细胞重悬于PBS，计数。计数完成后，继续以300 g，离心3 min。
离心完成后，弃上清，将细胞重悬于分选buffer中，调整细胞密度为1×10⁸ cells/mL。
2. CD11b微珠标记：每10⁷细胞中加入 10 µL CD11b微珠，混匀后 4 ℃孵育15 min，每隔5 min轻弹混匀，避免细胞聚集。
注意： 分选更多细胞时，按比例增加CD11b微珠用量（如分选5×10⁷细胞，需在500 μL细胞悬液中加入50 μL CD11b微珠）。
3. 洗涤细胞：孵育完成后，加入1 mL分选buffer（避免剧烈振荡或上下颠倒混匀）。300 g离心3 min，弃上清，加入1 mL分选buffer重悬细胞。
4. 磁珠分选：
将分选柱置于MACS分离器的磁场中，用缓冲液冲洗分选柱（MS柱： 500 μL；LS柱： 2 mL）。
将细胞悬液加入分选柱，收集未标记的流经细胞（可选），再用分选液清洗分选柱（MS柱： 2×1 mL；LS柱： 2×3 mL）。
5. 收集CD11b阳性细胞：移出分选柱，加入适量缓冲液，用柱塞快速冲洗，收集磁性标记的CD11b阳性细胞（MS柱： 2×1 mL；LS柱： 2×3 mL）。
注意： 每次液体完全流尽后再进行下一步操作。
6. （可选）二次富集： 若需更高纯度，可重复步骤4-5，在第二个分选柱上再次富集CD11b阳性细胞。
实验全程保持低温（4℃），动作迅速以减少细胞损伤。