MBNL1 Rabbit mAb
目录号: F3407
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Jurkat
Lane 2: Jurkat (transfected with MBNL1 siRNA 1）
Lane 3: Jurkat （transfected with MBNL1 siRNA 2）
Lane 4: Mouse heart
操作要点
蛋白定位：细胞质, 细胞核。
WB
建议使用 RIPA/NP-40 Lysis Buffer 制备裂解物。
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
WB
建议使用 RIPA/NP-40 Lysis Buffer 制备裂解物。
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IP, IF, FCM |
| 反应性 |
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| Human, Mouse |
| 抗体类型 |
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| Rabbit |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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42 kDa, 38 kDa, 34 kDa, 26 kDa
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实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 将细胞转移至EP管中。用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声破碎，冰上静置裂解 30 min。冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
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| MBNL1 Rabbit mAb 用于检测内源性 MBNL1 总的蛋白水平。 |
| 克隆号 |
|---|
| D7H10 |
| 背景 |
|---|
| MBNL1（肌盲1样蛋白）是一种RNA结合蛋白，调节可变剪接和RNA处理。它包含一组Cys2-His2锌指（ZnFs），对识别特定RNA基序（尤其是YGCY序列）至关重要。MBNL1通过其ZnF结构域与RNA结合，这些结构域识别结构化RNA（如发夹或茎环结构），从而调节剪接事件。MBNL1的主要功能是结合到前mRNA上，通过与剪接因子如U2AF65的相互作用，影响特定外显子的选择性剪接。此功能对于肌肉特异性基因的正确表达至关重要，这些基因涉及肌肉功能和发育。MBNL1还在调节miRNA生物生成中发挥作用，如它与前miR-1的相互作用。在如肌强直性肌营养不良症（DM1）等疾病中，扩展的CUG重复序列将MBNL1“隔离”，使其无法调节剪接，从而导致异常的可变剪接并促进疾病的发病。MBNL1还可以稳定RNA二级结构，防止剪接机制或其他调控蛋白的正确招募。MBNL1的功能失调导致在如肌肉和大脑等组织中众多剪接事件的细胞调控失常。 |
| 参考文献 |
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