Merlin Rabbit mAb

目录号: F0693

抗体应用：反应性：Human, Mouse, Rat, Monkey, Hamster

Lane 1: PC-3
Lane 2: MCF-7
Lane 3: Jrukat
Lane 4: SH-SY5Y

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
	400-668-6834 info@selleck.cn

操作要点

蛋白定位：细胞膜, 细胞突起, 细胞质, 细胞骨架, 内膜系统, 细胞核。
WB
建议使用 RIPA/NP-40 Lysis Buffer 制备裂解物。

使用信息

稀释比例
WB1:1000 IP1:50 IF1:200

抗体应用
WB, IP, IF

反应性
Human, Mouse, Rat, Monkey, Hamster

抗体类型
Rabbit

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
70 KDa

实验方法

WB
实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 将细胞转移至EP管中。用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声破碎，冰上静置裂解 30 min。冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 将细胞转移至EP管中。用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声破碎，冰上静置裂解 30 min。冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Merlin Rabbit mAb 用于检测内源性 Merlin 总的蛋白水平。

别名
Merlin,NF2

克隆号
M10J2

背景
Merlin（也叫Schwannomin）是由NF2基因编码的一种肿瘤抑制蛋白，是ezrin/radixin/moesin（ERM）蛋白家族的成员。它在神经系统中高度表达，并在维持组织结构和防止细胞不受控制的增殖中起着关键作用。Merlin的结构包括N端FERM结构域、中央α螺旋区和C端结构域。FERM结构域对于蛋白质相互作用和肿瘤抑制活动至关重要，而C端结构域与FERM结构域相互作用来调节Merlin的构象和活性。Merlin通过将细胞骨架与质膜连接，调节细胞形状、迁移和生长。它作为Hippo通路的负向调节因子，控制细胞生长和凋亡。Merlin还抑制Ras和Rac信号通路，有助于接触依赖性生长抑制。Merlin的活性通过翻译后修饰，特别是磷酸化进行调节。PAK2或PKA在Ser518位点的磷酸化促进了Merlin的封闭非活性构象，减少了其肿瘤抑制功能。相反，去磷酸化增强了Merlin的肿瘤抑制功能。Merlin可以通过FERM-FERM相互作用形成二聚体，这对于其与结合伙伴的相互作用和肿瘤抑制活性至关重要。Merlin还参与调节细胞黏附，特别是在细胞-细胞连接处，并在力感应转导中发挥作用。它与CD44、NHERF1和Angiomotin相互作用，介导其功能。此外，Merlin还被认为在脂肪酸合成的调节中发挥作用，拓宽了其在细胞代谢中的作用。Merlin功能失调会导致肿瘤的发生，特别是神经纤维瘤和脑膜瘤，这是2型神经纤维瘤病的特征。

背景

Merlin（也叫Schwannomin）是由NF2基因编码的一种肿瘤抑制蛋白，是ezrin/radixin/moesin（ERM）蛋白家族的成员。它在神经系统中高度表达，并在维持组织结构和防止细胞不受控制的增殖中起着关键作用。Merlin的结构包括N端FERM结构域、中央α螺旋区和C端结构域。FERM结构域对于蛋白质相互作用和肿瘤抑制活动至关重要，而C端结构域与FERM结构域相互作用来调节Merlin的构象和活性。Merlin通过将细胞骨架与质膜连接，调节细胞形状、迁移和生长。它作为Hippo通路的负向调节因子，控制细胞生长和凋亡。Merlin还抑制Ras和Rac信号通路，有助于接触依赖性生长抑制。Merlin的活性通过翻译后修饰，特别是磷酸化进行调节。PAK2或PKA在Ser518位点的磷酸化促进了Merlin的封闭非活性构象，减少了其肿瘤抑制功能。相反，去磷酸化增强了Merlin的肿瘤抑制功能。Merlin可以通过FERM-FERM相互作用形成二聚体，这对于其与结合伙伴的相互作用和肿瘤抑制活性至关重要。Merlin还参与调节细胞黏附，特别是在细胞-细胞连接处，并在力感应转导中发挥作用。它与CD44、NHERF1和Angiomotin相互作用，介导其功能。此外，Merlin还被认为在脂肪酸合成的调节中发挥作用，拓宽了其在细胞代谢中的作用。Merlin功能失调会导致肿瘤的发生，特别是神经纤维瘤和脑膜瘤，这是2型神经纤维瘤病的特征。

参考文献
[1] Morrow KA, et al. Biochim Biophys Acta. 2012 Dec;1826(2):400-6. [2] Hertlein V, et al. Life Sci Alliance. 2019 Dec 9;3(1):e201900600.

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%