NVP-BSK805 2HCl

For research use only. Not for use in humans.

目录号:S2686 别名: BSK805

NVP-BSK805 2HCl Chemical Structure

CAS No. 1942919-79-0

NVP-BSK805 2HCl是一种有效的,选择性的,ATP竞争性的JAK2抑制剂,IC50为0.5 nM,比作用于JAK1, JAK3和TYK2选择性高20倍以上。

规格 价格 库存 购买数量  
10mM (1mL in DMSO) RMB 4994.67 现货
RMB 2214.99 现货
RMB 3043.96 现货
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客户使用Selleck生产的NVP-BSK805 2HCl发表文献9篇:

客户使用该产品的3个实验数据:

  • Determination of the kynurenine production in HFF cells after IDO induction by IFN-γ (100 U/mL). The cells were incubated for 72 h under normoxia (20% O2) or hypoxia (1% O2) and treated with different amounts of the JAK2 inhibitor BSK805 (0-2 uM).

    PLoS One 2013 8(5), e63301. NVP-BSK805 2HCl purchased from Selleck.

    HEL cells were treated for 3 hours with the indicated concentrations of NVP-BSK805. NVP-BSK805 inhibits Jak2-V617F mediated signal transduction at nanomolar concentrations in intact cells.

    Dr. Catherine Rolvering and Dr. Claude Haan of Université du Luxembour. NVP-BSK805 2HCl purchased from Selleck.

  • Co-treatment of NVP-BSK805 (BSK) and PF-4708671 (PF) induces Bim and PUMA expression. HCT116 and EJ cells were treated with 6 μm of BSK and 30 μm of PF for 36 h.

    J Biol Chem, 2015, 290(39):23553-62. NVP-BSK805 2HCl purchased from Selleck.

产品安全说明书

JAK抑制剂选择性比较

生物活性

产品描述 NVP-BSK805 2HCl是一种有效的,选择性的,ATP竞争性的JAK2抑制剂,IC50为0.5 nM,比作用于JAK1, JAK3和TYK2选择性高20倍以上。
靶点
JAK2 [1]
(Cell-free assay)
TYK2 [1]
(Cell-free assay)
JAK3 [1]
(Cell-free assay)
JAK1 [1]
(Cell-free assay)
~0.5 nM 10.76 nM 18.68 nM 31.63 nM
体外研究

NVP-BSK805是JAK2强有效的抑制剂,且对JAK2的特异性很好,其对JAK2的抑制效果比对JAK1, JAK3和TYK2要强20倍。0.5 nM 的NVP-BSK805对全长JAK2V617F和野生型JAK2酶产生一半的最大抑制效果。NVP-BSK805阻断JAK2V617F细胞(Ba/F3)的生长,且诱导细胞凋亡,其GI50在<100 nM的浓度。STAT5磷酸化作用是依赖JAK2的基本的磷酸化作用,在JAK2 V617F突变的细胞中,大于等于100 nM的 NVP-BSK805像MB-02一样能显著抑制STAT5的磷酸化作用。分别用150 nM和1µM的NVP-BSK805孵育SET-2细胞,分别能抑制75%和95%的细胞生长,且在这两个浓度下培养24, 48和72小时,发现会引起浓度和时间依赖的细胞凋亡。可以检测裂开的PARP、Bcl-xL表达的减少和急剧增加的DNA含量少于2N的细胞数量,通过检测这些确定结果。[1] NVP-BSK805引起的细胞凋亡是需要通过激活凋亡蛋白级联反应来实现的,而当在SET-2和MB-02细胞中抑制细胞凋亡蛋白酶caspase则可以抑制这种NVP-BSK805引起的细胞凋亡。在JAK2V617F细胞, SET-2和MB-02细胞中,NVP-BSK805能调节Bim的翻译后修饰和Mcl-1的水平。[2]

Assay
Methods Test Index PMID
Western blot
p-STAT5 / STAT5 / PARP / Cleaved Caspase-3 / Cleaved caspase-7 / Cleaved Caspase-8 / Cleaved Caspase-9 / Bim / Mcl-1 ; 

PubMed: 21247487     


SET-2 cells were treated with 500 nM of the JAK2 inhibitor NVP-BSK805 and extracted at the indicated time points for Western blot analysis. Control (Ctrl) cells were treated with the drug vehicle DMSO for 72 hours. Induction of apoptosis markers becomes evident starting at the 16 hours time point. Arrowhead denotes cleaved PARP, running below the band for full-length PARP. The caspase-8 blot shows the p43/p41 cleavage intermediates and active caspase-8 fragment p18.

p-JAK2 / JAK2 ; 

PubMed: 22684457     


SET-2 cells were treated with increasing concentrations of NVP-BSK805 for 30 minutes and then assessed by western blot.

21247487 22684457
体内研究 口服NVP-BSK805生物药的利用效率在小鼠体内的实验估计为45%,在大鼠实验中估计为50%。给携带Ba/F3 JAK2V617F细胞的小鼠模型口服150 mg/kg的NVP-BSK805能抑制STAT5的磷酸化,脾肿大及白血病细胞的扩散。给BALB/c小鼠口服25, 50和100 mg/kg剂量的NVP-BSK805,能抑制rhEpo诱导的STAT5磷酸化反应和rhEpo调节的红细胞增多和脾肿大。[1]

推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)

激酶实验:[1]
- 合并

酶活性分析:

构建含有人的JAK2激酶结构域(840-1132位氨基酸)的质粒pAcG2TtevJAK2。分别设计构建了JAK3 (813-1124), TYK2 (888-1187)和JAK1(866-1154)的质粒。通过产品手册(BD Biosciences Pharmingen)构建含有BD BaculoGoldTM Bright线性DNA的融合杆状病毒,空斑实验以及单一斑块病毒扩增实验。用100 mL加了青霉素/链霉素(Sigma)的 ExCell420培养基(JRH Biosciences Ltd)在27 ℃培养Sf9细胞48小时,用于表达Janus激酶结构域。在悬浮培养的细胞浓度在1 × 106时进行感染,用感染病毒后可溶性蛋白的产量优化每个病毒的感染复数(MOI)。分别在MOI为1和0.5的时候表达人的JAK2的激酶结构域和JAK1, JAK3和TYK2的激酶结构域。27 ℃下培养48小时表达JAK2,而JAK1, JAK3和TYK2则需48或72小时表达。感染后48小时或72小时后,将100 mL表达培养基用3000 ×g离心5分钟收集细胞,用12 mL裂解缓冲液裂解细胞,缓冲液成分为50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 2 mM EDTA, 1 mM DTT, 1 mM原钒酸钠, 1 % Triton X-100, 10 % 甘油, 1× 不含EDTA的完全蛋白酶抑制剂混合物(Roche Diagnostics)和12.5 U/mL Benzonase。4℃孵育30分钟,14,000 × g离心45分钟分离颗粒性不可溶物质。然后在4 ℃下用GST标签亲和纯化蛋白激酶结构域。将之前离心所得的上清与0.2 mL含有50 %的谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B的悬浮液在4 ℃下孵育2小时,然后用1 mL含有50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.1 % Triton X-100, 1 mM DTT和10 %甘油的缓冲液洗5次。用0.25 mL的洗脱缓冲液(50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.1 % Triton X-100, 1mM DTT, 10 % 甘油, 10 mM还原性L-谷胱甘肽)洗脱结合到胶上的蛋白,分5次洗脱,每次孵育10分钟。用Amicon Ultra-4离心超滤管浓缩洗脱液到五分之一的体积。加入终浓度0.1 %的Brij35后,将蛋白分成小份,置于-80℃速冻保存,在这种储存条件下其激酶活性能保持至少6个月。在含有0.1 μM [γ33P]-ATP, 1 mM MnCl2, 5 mM MgCl2, 30 μM合成的多肽底物EQEDEPEGDYFEWLE, 1 mM DTT, 1 % DMSO, 50 μg/mL BSA, 0.01 % Brij35和50 mM Tris-HCl pH 7.5的缓冲体系中加入JAK激酶结构域作为酶,室温孵育30分钟。对于所有的蛋白ATP的浓度都低于其Km值。用XLfit® (型号205)的逻辑斯谛方程和全局拟合功能对曲线进行非线性回归拟合。像激酶实验的条件一样全长野生型JAK2及其突变体V617F的表达及鉴定,实验方法在其他地方已经介绍了。用内源激酶通路分析NVP-BSK805的激酶选择性实验,在Caliper实验中,在电场中当多肽底物被磷酸化后会有不同的迁移速度,以此来检测激酶实验。多肽带有荧光标签,可以在毛细管系统中用于检测、离子交换及定量。用LC3000仪器(Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA, USA)对多肽的荧光进行定量。激酶实验中激酶的活性可以通过检测剩余的ATP的数量来定量。LanthaScreenTM TR-FRET激酶实验中,铽元素当做镧系元素螯合物融合了抗磷酸化底物的抗体。
细胞实验:[1]
- 合并
  • Cell lines: Ba/F3细胞
  • Concentrations: 100 nM
  • Incubation Time: 72小时
  • Method: 可以通过比色分析试剂盒WST-1 (Roche Diagnostics GmbH)来检测细胞存活率,用于分析对比用8点浓度范围的药物培养72小时后细胞的存活情况以及用DMSO处理细胞后产生相关的细胞增殖变化情况,这样可以检测JAK2抑制剂抑制细胞增殖的能力。重复三次后,计算平均值,XLfit 4 软件绘图,可以得到抑制最大生长一半(GI50)的数值。
    (Only for Reference)
动物实验:[1]
- 合并
  • Animal Models: RhEpo诱导的红血球增多症的雌性BALB/c小鼠
  • Dosages: 50, 75和100 mg/kg
  • Administration: 每天口服一次
    (Only for Reference)

溶解度 (25°C)

体外 DMSO 113 mg/mL (200.54 mM)
Ethanol 15 mg/mL (26.62 mM)
Water 3 mg/mL (5.32 mM)
体内 从左到右依次将纯溶剂加入产品,现配现用(数据来自Selleck实验检测而非文献):
30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol
30 mg/mL

* 溶解度检测是由Selleck技术部门检测的,可能会和文献中提供的溶解度有所差异,这是由于生产工艺和批次不同产生的正常现象。请按照顺序依次加入各个纯溶剂。

化学数据

分子量 563.47
化学式

C27H28F2N6O.2HCl

CAS号 1942919-79-0
储存条件 粉状
溶于溶剂
别名 BSK805

动物体内配方计算器 (澄清溶液)

第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
给药剂量 mg/kg 动物平均体重 g 每只动物给药体积 ul 动物数量
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系Selleck为您提供正确的澄清溶液配方)
% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
计算重置

计算器

摩尔浓度计算器

摩尔浓度计算器

本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:

质量 (mg) = 浓度 (mM) x 体积 (mL) x 分子量 (g/mol)

摩尔浓度计算公式

  • 质量
    浓度
    体积
    分子量

*在配置溶液时,请务必参考Selleck产品标签上、MSDS / COA(可在Selleck的产品页面获得)批次特异的分子量使用本工具。

稀释计算器

稀释计算器

用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:

开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积

稀释公式

稀释公式一般简略地表示为: C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )

  • C1
    V1
    C2
    V2

在配置溶液时,请务必参考Selleck产品标签上、MSDS / COA(可在Selleck的产品页面获得)批次特异的分子量使用本工具。.

连续稀释计算器方程

  • 连续稀释

  • 计算结果

  • C1=C0/X C1: LOG(C1):
    C2=C1/X C2: LOG(C2):
    C3=C2/X C3: LOG(C3):
    C4=C3/X C4: LOG(C4):
    C5=C4/X C5: LOG(C5):
    C6=C5/X C6: LOG(C6):
    C7=C6/X C7: LOG(C7):
    C8=C7/X C8: LOG(C8):
分子量计算器

分子量计算器

通过输入化合物的化学式来计算其分子量:

总分子量:g/mol

注:化学分子式大小写敏感。C10H16N2O2 c10h16n2o2

摩尔浓度计算器

质量 浓度 体积 分子量
计算

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操作手册

如果有其他问题,请给我们留言。

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