CD11b Antibody [F15D4]

目录号: F0040

抗体应用：反应性：Mouse

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
400-668-6834 info@selleck.cn

操作要点

本抗体需使用抗大鼠二抗。

使用信息

稀释比例
IHC1:100 FCM1:4000

抗体应用
IP, IHC, FCM

反应性
Mouse

抗体类型
Rat Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
165-170 kDa

阳性对照	Mouse bone marrow; Mouse spleen tissue
阴性对照

实验方法

IHC
实验步骤：脱蜡/补液 1. 脱蜡/水合切片： 2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。 3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。 4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。 5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。染色 1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。 2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。 3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。 5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。 6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。 7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。 9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。 11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。 12. 将载玻片浸入 dH2O 中。 13. 如果需要，用苏木精复染切片。 14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。 16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

IHC

实验步骤：

脱蜡/补液

1. 脱蜡/水合切片：

2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。

3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。

4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。

5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。

染色

1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。

2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。

3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。

5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。

6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。

7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。

9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。

11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。

12. 将载玻片浸入 dH2O 中。

13. 如果需要，用苏木精复染切片。

14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。

16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
CD11b Antibody [F15D4] 可检测内源性 CD11b 总蛋白水平。

蛋白定位
细胞质，细胞核

Uniprot ID
P21127

克隆号
F15D4

别名
CD11 antigen-like family member B; CD11B (p170); cell surface glycoprotein MAC-1 alpha subunit; cell surface glycoprotein MAC-1 subunit alpha; complement component receptor 3 alpha-a; Mac1A; Cd11b; CD11b/CD18; CR3; CR3A; F730045J24Rik; Ly-40; Mac-1; Mac-1a; MAC1

背景
CD11b，又称整合素αM（ITGAM），是一种跨膜α链蛋白，它与β-2链CD18非共价异二聚化形成Mac-1（αMβ2或CR3）整合素。Mac-1整合素在髓系细胞（如中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞）上高表达，是这些固有免疫细胞群的关键标志物。该整合素的α亚基包含一个β螺旋桨结构域和一个配体结合插入（I/A）结构域，使其能够与多种配体相互作用，包括iC3b、ICAM-1和纤维蛋白原。与疾病相关的ITGAM变异体，例如R77H (rs1143679)、P1146S (rs1143678)和A858V (rs1143683)，会轻微改变β螺旋桨结构，降低配体亲和力，但不会显著影响表面表达。CD11b介导促炎过程，例如白细胞黏附、迁移、跨内皮迁移以及对调理素化颗粒（凋亡细胞和免疫复合物）的吞噬作用，同时还通过Src/Syk介导的磷酸化以及Cbl-b依赖的MyD88和TRIF的泛素化和降解，负向调控Toll样受体(TLR)信号通路，从而发挥重要的抗炎作用，抑制NF-κB活化和促炎细胞因子（IL-6、TNF-α、IL-1β）的产生。 CD11b 还通过 AKT/FOXO3/IRF3/7 通路抑制 I 型干扰素 (IFN-I) 的产生，维持核内 FOXO3 的存在以抑制 IRF7 和 IFN-β/IRF7 的表达；ITGAM 变异携带者的这一机制存在缺陷，导致基础 IFN-I 水平升高、TLR 反应失控、B 细胞耐受性受损、自身反应性 B 细胞活化增强以及 Th17 细胞分化增加。这些免疫失调赋予系统性红斑狼疮 (SLE) 和狼疮性肾炎 (LN) 的高遗传风险，ITGAM 变异与血清 IFN-I 水平升高、肾脏受累、自身抗体产生、肾小球损伤和免疫复合物清除不良相关。

背景

CD11b，又称整合素αM（ITGAM），是一种跨膜α链蛋白，它与β-2链CD18非共价异二聚化形成Mac-1（αMβ2或CR3）整合素。Mac-1整合素在髓系细胞（如中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞）上高表达，是这些固有免疫细胞群的关键标志物。该整合素的α亚基包含一个β螺旋桨结构域和一个配体结合插入（I/A）结构域，使其能够与多种配体相互作用，包括iC3b、ICAM-1和纤维蛋白原。与疾病相关的ITGAM变异体，例如R77H (rs1143679)、P1146S (rs1143678)和A858V (rs1143683)，会轻微改变β螺旋桨结构，降低配体亲和力，但不会显著影响表面表达。CD11b介导促炎过程，例如白细胞黏附、迁移、跨内皮迁移以及对调理素化颗粒（凋亡细胞和免疫复合物）的吞噬作用，同时还通过Src/Syk介导的磷酸化以及Cbl-b依赖的MyD88和TRIF的泛素化和降解，负向调控Toll样受体(TLR)信号通路，从而发挥重要的抗炎作用，抑制NF-κB活化和促炎细胞因子（IL-6、TNF-α、IL-1β）的产生。 CD11b 还通过 AKT/FOXO3/IRF3/7 通路抑制 I 型干扰素 (IFN-I) 的产生，维持核内 FOXO3 的存在以抑制 IRF7 和 IFN-β/IRF7 的表达；ITGAM 变异携带者的这一机制存在缺陷，导致基础 IFN-I 水平升高、TLR 反应失控、B 细胞耐受性受损、自身反应性 B 细胞活化增强以及 Th17 细胞分化增加。这些免疫失调赋予系统性红斑狼疮 (SLE) 和狼疮性肾炎 (LN) 的高遗传风险，ITGAM 变异与血清 IFN-I 水平升高、肾脏受累、自身抗体产生、肾小球损伤和免疫复合物清除不良相关。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30568188/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16857989/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%