Complex I Immunocapture Antibody [K15L2]

目录号: F2553

抗体应用：反应性：Mouse, Rat, Cow, Human

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
400-668-6834 info@selleck.cn

使用信息

稀释比例
IP1:10 IF1:1000 FCM1:1000

抗体应用
IP, IF, FCM

反应性
Mouse, Rat, Cow, Human

抗体类型
Mouse Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

阳性对照	Human heart mitochondria; Bovine heart mitochondria; Mouse heart mitochondria; Mouse brain mitochondria; Fibroblasts cells; HL-60 cells; HepG2 cells
阴性对照

实验方法

IF
实验步骤：样品准备 1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。 2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。 3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。 4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。固定 1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。 2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。通透 1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。） 2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。封闭添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。免疫荧光染色（第一天） 1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。 2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。免疫荧光染色（第二天） 1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。 2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。 3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。 4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光孵育 5~10 min。 5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。封片 1. 抗荧光淬灭封片剂封片。 2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。 3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。

实验步骤：

样品准备

1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。

2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。

3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。

4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。

固定

1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。

2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。

通透

1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。

（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）

2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。

封闭

添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）

注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。

免疫荧光染色（第一天）

1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。

2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。

免疫荧光染色（第二天）

1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。

2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。

3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。

4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光孵育 5~10 min。

5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。

封片

1. 抗荧光淬灭封片剂封片。

2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。

3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Complex I Immunocapture Antibody [K15L2] 可检测内源性 Complex I Immunocapture 总蛋白水平。

克隆号
K15L2

背景
复合物I（NADH：泛醌氧化还原酶）是线粒体内膜上最大的L形酶复合物，由约45个亚基组成，其中14个核心亚基在不同物种间保守。其亲水性外周臂包含FMN辅因子和8-9个铁硫簇（例如N3、N1b、N4、N5、N6a/b、N2）组成的电子传递链，而膜臂则包含四个质子泵模块（P_D、P_P、P_NuoL、P_NuoM），这些模块由带电残基和螺旋重排驱动。来自线粒体基质NADH的电子从N模块（NDUFV1/2）进入，沿着FeS簇穿过约90 Å到达Q模块的N2 [4Fe-4S]簇（靠近NDUFS2/7），并通过半醌中间体在约30 Å的隧道中还原泛醌。该氧化还原反应（驱动力约为-150 mV）与构象波介导的每两个电子携带四个质子的矢量易位紧密耦合。泛醌的结合引发双态稳定，使复合物刚性化，并通过反向转运样螺旋（ND2/4/5中的TMH 38-42）将变构变化从Q位点传递到远端泵，从而产生用于ATP合成的膜电位（Δψ），并通过保持N2-Q距离较短（约7 Å）来最大限度地减少超氧化物的产生。作为氧化磷酸化的入口，复合物I维持细胞能量平衡，连接三羧酸循环和NADH稳态，并影响活性氧信号传导和线粒体DNA的维持。由基因突变（例如NDUFS4、ND1）或组装缺陷引起的功能障碍会导致活性氧水平升高、生物能量代谢受损，并引发多种疾病，例如莱氏综合征、MELAS、帕金森病（通过抑制α-突触核蛋白）和莱伯氏遗传性视神经病变，尤其会影响能量需求高的神经元。

背景

复合物I（NADH：泛醌氧化还原酶）是线粒体内膜上最大的L形酶复合物，由约45个亚基组成，其中14个核心亚基在不同物种间保守。其亲水性外周臂包含FMN辅因子和8-9个铁硫簇（例如N3、N1b、N4、N5、N6a/b、N2）组成的电子传递链，而膜臂则包含四个质子泵模块（P_D、P_P、P_NuoL、P_NuoM），这些模块由带电残基和螺旋重排驱动。来自线粒体基质NADH的电子从N模块（NDUFV1/2）进入，沿着FeS簇穿过约90 Å到达Q模块的N2 [4Fe-4S]簇（靠近NDUFS2/7），并通过半醌中间体在约30 Å的隧道中还原泛醌。该氧化还原反应（驱动力约为-150 mV）与构象波介导的每两个电子携带四个质子的矢量易位紧密耦合。泛醌的结合引发双态稳定，使复合物刚性化，并通过反向转运样螺旋（ND2/4/5中的TMH 38-42）将变构变化从Q位点传递到远端泵，从而产生用于ATP合成的膜电位（Δψ），并通过保持N2-Q距离较短（约7 Å）来最大限度地减少超氧化物的产生。作为氧化磷酸化的入口，复合物I维持细胞能量平衡，连接三羧酸循环和NADH稳态，并影响活性氧信号传导和线粒体DNA的维持。由基因突变（例如NDUFS4、ND1）或组装缺陷引起的功能障碍会导致活性氧水平升高、生物能量代谢受损，并引发多种疾病，例如莱氏综合征、MELAS、帕金森病（通过抑制α-突触核蛋白）和莱伯氏遗传性视神经病变，尤其会影响能量需求高的神经元。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19355884/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34767441/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%