IL-2 Antibody (Rabbit mAb) [G3L7]
目录号: F6608
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Recombinant Human Interleukin-2
操作要点
WB
湿转参考条件：200 mA, 60 min，建议使用 0.22 μm PVDF膜。
湿转参考条件：200 mA, 60 min，建议使用 0.22 μm PVDF膜。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IP |
| 反应性 |
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| Human |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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18 kDa
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| 阳性对照 | Jurkat cells (TPA, 40 nM, overnight; A23187, 2 μM; BFA, 300 ng/ml, 45 min delay) |
|---|---|
| 阴性对照 | Jurkat cells |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.22 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| IL-2 Antibody (Rabbit mAb) [G3L7] 可检测内源性 IL-2 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
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| 细胞外环境 |
| Uniprot ID |
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| P60568 |
| 克隆号 |
|---|
| G3L7 |
| 别名 |
|---|
| aldesleukin, IL-2, IL2, interleukin 2, Interleukin-2, involved in regulation of T-cell clonal expansion, lymphokine, cell growth factor, T-cell growth factor, TCGF |
| 背景 |
|---|
| 白细胞介素-2 (IL-2) 是一种I型细胞因子，属于共同γ链家族，主要由活化的T细胞产生，是T细胞和NK细胞扩增、分化和存活的关键调节因子。该蛋白具有该细胞因子家族典型的四螺旋束折叠结构，并通过由IL-2Rα (CD25)、IL-2Rβ (CD122) 和共同γ链 (γc, CD132) 组成的受体系统传递信号。这些亚基根据其组成和在不同淋巴细胞亚群上的表达水平，组装成具有不同亲和力的受体。 IL-2Rα以低亲和力结合IL-2，并将该细胞因子呈递给IL-2Rβ和γc，形成中高亲和力的信号复合物。IL-2Rβ和γc构成信号核心，并与其他γc型细胞因子共享。其中，IL-2Rβ还与IL-15结合，γc参与IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21受体复合物的形成。IL-2与IL-2Rβ和γc的结合使相关的酪氨酸激酶JAK1和JAK3聚集，诱导其活化，并导致受体胞质尾部的磷酸化，进而募集并激活STAT5。STAT5二聚化后转位至细胞核，驱动IL-2反应基因的转录。 IL-2 还通过信号中间体与磷酸化受体基序的结合，与 PI3K-Akt 和 MAPK 通路连接，产生额外的输出，从而影响 IL-2 反应性淋巴细胞的代谢活性、细胞周期进程和存活。在 CD4⁺ T 细胞群中，IL-2-STAT5 信号通路支持效应 T 细胞的增殖和功能，同时维持调节性 T 细胞 (Treg) 的发育、维持和抑制能力。Treg 细胞表达高亲和力 IL-2 受体，并依赖于常规 T 细胞产生的 IL-2。IL-2 信号通路通过促进扩增的 T 细胞中死亡通路组分的表达，参与活化诱导的细胞死亡，从而参与抗原清除后 T 细胞反应的收缩。持续或改变的 IL-2 通路活性与免疫失调有关，包括当 IL-2 可用性或 IL-2R 向 Treg 细胞发出信号减少时发生的自身免疫，以及当效应 IL-2 反应受限时发生的病原体控制或抗肿瘤反应受损。 |
| 参考文献 |
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