MLLT1/ENL Antibody [N21N24]
目录号: F7572
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Jurkat, Lane 2: K562, Lane 3: MDA-MB-453, Lane 4: SK-N-MC
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, ChIP |
| 反应性 |
|---|
| Human |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
|
预测分子量
|
|---|
|
80 kDa
|
| 阳性对照 | Jurkat cells; K‑562 cells; MDA‑MB‑453 cells; SK‑N‑MC cells; MV‑4‑11 cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
|
生物描述
| 特异性 |
|---|
| MLLT1/ENL Antibody [N21N24] 可检测内源性 MLLT1/ENL 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞核 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q03111 |
| 克隆号 |
|---|
| N21N24 |
| 别名 |
|---|
| Protein ENL; MLLT1; ENL |
| 背景 |
|---|
| MLLT1，通常被称为ENL，属于酵母十一-十九白血病（ENL）蛋白家族，是超延伸复合物（SEC）中的染色质阅读器。SEC是一种多蛋白复合物，通过抑制启动子近端暂停来驱动RNA聚合酶II（RNAPII）的转录延伸。该蛋白包含一个N端YEATS结构域，可选择性地结合乙酰化和巴豆酰化的组蛋白尾，特别是H3K9ac，从而促进SEC募集到活性基因位点。此外，它还包含一个整合的YEATS-YeATS二聚化界面，并与P-TEFb激酶结合，从而磷酸化RNAPII C端结构域（CTD）的Ser2位点。在SEC中，ENL与AFF4、MLLT3/AF9和ELL蛋白协同作用，加速RNAPII的延伸，释放负延伸因子DSIF和NELF，从而使发育基因（如HOX基因簇）能够进行有效的延伸。 ENL 还整合到 Dot1L 组蛋白 H3K79 甲基转移酶复合物中，在那里它将 DOT1L 募集到延伸位点，沉积 H3K79me2/3 标记，从而稳定开放染色质并增强原癌基因（如 MYC）以及 MLL 融合靶基因的转录。ATM 激酶的磷酸化作用调节 ENL 的功能，使其能够与多梳抑制复合物 1 (PRC1) 的组分 BMI1 和 RING1B 结合，后者沉积 H2AK119ub 并将 DNA 损伤反应位点的活跃延伸转变为抑制。YEATS 结构域形成一个刚性口袋，用于与组蛋白进行刚性结合，而 MLL-ENL 融合断点保留了该结构域，从而异常地将 SEC 和 Dot1L 锚定到 MLL 基因组靶点上。 MLLT1 融合失调通过持续的 HOX/MYC 过表达驱动混合谱系白血病，而 Wilms 肿瘤等实体瘤中的体细胞突变通过 PITX2 和 MYC 上调增强 Wnt/β-catenin 信号传导。 |
| 参考文献 |
|---|
|
技术支持
在订购、运输、储存和使用我们的产品的任何阶段，您遇到的任何问题，均可以通过拨打我们的热线电话400-668-6834，或者技术支持邮箱tech@selleck.cn，直接联系到我们。我们会在24小时内尽快联系您。
* 必填项
