Phospho-4E-BP1 (Thr37) Antibody [L9H8]

目录号: F2723

抗体应用：反应性：Human

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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使用信息

稀释比例
WB1:1000-1:2000

抗体应用
WB

反应性
Human

抗体类型
Rabbit Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量实际分子量
13 kDa 17 kDa
^*为什么预测分子量和实际分子量会有不同？以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Phospho-4E-BP1 (Thr37) Antibody [L9H8] 仅识别 Thr37 处磷酸化的内源性 4E-BP1 蛋白水平。

克隆号
L9H8

别名
Eukaryotic translation initiation factor 4E-binding protein 1, 4E-BP1, eIF4E-binding protein 1, Phosphorylated heat- and acid-stable protein regulated by insulin 1, PHAS-I, EIF4EBP1

背景
磷酸化4E-BP1 (Thr37) 代表了帽依赖性翻译通路中eIF4E结合蛋白1的一种早期、mTOR依赖性的调控状态，它作为一种启动修饰，整合了来自PI3K-Akt-mTOR通路的生长因子和营养信号，从而实现多位点磷酸化并调控翻译起始。低磷酸化的4E-BP1通过位于包含Thr37和Thr46的中心区域附近的典型YXXXXLΦ基序与mRNA帽结合蛋白eIF4E紧密结合，阻碍eIF4G的对接，并阻止eIF4F复合物的组装。eIF4F复合物负责将40S核糖体亚基募集到5′帽上。同时，N端和C端区域稳定了这种抑制构象，并响应上游激酶的输入。当 4E-BP1 与 eIF4E 形成复合物时，FRAP/mTOR 直接在 Thr37 和 Thr46 位点磷酸化 4E-BP1，生成与体内两个最显著的 4E-BP1 磷酸肽共迁移的磷酸肽，并将 Thr37 和 Thr46 鉴定为 mTOR 的主要靶位点；即使在血清饥饿的细胞中，这些残基也高度磷酸化，并且存在于所有电泳不同的磷酸化 4E-BP1 亚型中，包括与 eIF4E 结合的形式。 Thr37 和 Thr46 的磷酸化不会破坏 4E-BP1-eIF4E 复合物或改变电泳迁移率，但突变分析表明，Thr37/Thr46 的磷酸化对于 C 端半段下游“血清敏感”位点（Thr70 和 Ser65）的有效后续磷酸化是必需的，因为 Thr37Ala、Thr46Ala 或双 Thr37Ala/Thr46Ala 取代会使 4E-BP1 的总磷酸掺入量减少 10-20 倍，并消除 C 端磷酸肽的出现，而不会损害基础 eIF4E 结合，这定义了磷酸化 Thr37/Thr46 是 eIF4E 分级磷酸化和释放的必要启动事件。在饥饿条件下，Thr37 和 Thr46 的磷酸化对雷帕霉素和 LY294002 敏感，并由 PI3K-Akt-mTOR 轴驱动：PI3K 或 Akt 抑制，或雷帕霉素敏感的 mTOR 阻断，均可降低 Thr37/Thr46 的磷酸化水平；而组成型活性 Akt 则促进血清刺激期间靶向的相同位点的磷酸化，这使得 Thr37 磷酸化的 4E-BP1 成为 Akt 下游 mTORC1 输出的近端报告分子。在果蝇中，同源物 d4E-BP 表现出 Thr37 和 Thr46 之间保守的调控相互作用，其中胰岛素刺激的 Thr46 磷酸化（可通过磷酸化 Thr37/46 抗体检测）是将 d4E-BP 从 eIF4E 结合的翻译抑制因子转化为结合力较弱形式的主要事件；这种调控依赖于胰岛素-PI3K-Akt-TSC-TOR信号通路，因为针对Dp110（PI3K）、dAkt、dTSC1或dTOR的RNAi分别会降低或增加d4E-BP Thr37/Thr46的磷酸化水平，并以符合线性Akt→TSC→TOR→4E-BP通路的方式改变d4E-BP的亚型模式。果蝇的层级分析表明，在血清饥饿的细胞中，d4E-BP在不阻止eIF4E相互作用的位点上携带多个磷酸基团。胰岛素以雷帕霉素敏感的方式触发Thr46位点的额外磷酸化，这与酸性更强的亚型的出现和eIF4E结合的减少相一致。这在功能上反映了哺乳动物4E-BP1中Thr37/Thr46磷酸化启动的必要性，该磷酸化启动后续修饰，从而释放eIF4E并允许eIF4F组装。这些发现表明，磷酸化 4E-BP1 (Thr37) 处于一个两步机制中，其中 mTORC1 首先磷酸化 eIF4E 结合的 4E-BP1 上的 Thr37/Thr46，以产生启动中间体，然后其他激酶——仍然在 mTORC1 信号传导环境中运行——修饰 Thr70 和 Ser65，最终导致 eIF4E 结合的丧失，从抑制性翻译状态转变为允许性翻译状态，以及生长和存活相关蛋白的合成增加。

背景

磷酸化4E-BP1 (Thr37) 代表了帽依赖性翻译通路中eIF4E结合蛋白1的一种早期、mTOR依赖性的调控状态，它作为一种启动修饰，整合了来自PI3K-Akt-mTOR通路的生长因子和营养信号，从而实现多位点磷酸化并调控翻译起始。低磷酸化的4E-BP1通过位于包含Thr37和Thr46的中心区域附近的典型YXXXXLΦ基序与mRNA帽结合蛋白eIF4E紧密结合，阻碍eIF4G的对接，并阻止eIF4F复合物的组装。eIF4F复合物负责将40S核糖体亚基募集到5′帽上。同时，N端和C端区域稳定了这种抑制构象，并响应上游激酶的输入。当 4E-BP1 与 eIF4E 形成复合物时，FRAP/mTOR 直接在 Thr37 和 Thr46 位点磷酸化 4E-BP1，生成与体内两个最显著的 4E-BP1 磷酸肽共迁移的磷酸肽，并将 Thr37 和 Thr46 鉴定为 mTOR 的主要靶位点；即使在血清饥饿的细胞中，这些残基也高度磷酸化，并且存在于所有电泳不同的磷酸化 4E-BP1 亚型中，包括与 eIF4E 结合的形式。 Thr37 和 Thr46 的磷酸化不会破坏 4E-BP1-eIF4E 复合物或改变电泳迁移率，但突变分析表明，Thr37/Thr46 的磷酸化对于 C 端半段下游“血清敏感”位点（Thr70 和 Ser65）的有效后续磷酸化是必需的，因为 Thr37Ala、Thr46Ala 或双 Thr37Ala/Thr46Ala 取代会使 4E-BP1 的总磷酸掺入量减少 10-20 倍，并消除 C 端磷酸肽的出现，而不会损害基础 eIF4E 结合，这定义了磷酸化 Thr37/Thr46 是 eIF4E 分级磷酸化和释放的必要启动事件。在饥饿条件下，Thr37 和 Thr46 的磷酸化对雷帕霉素和 LY294002 敏感，并由 PI3K-Akt-mTOR 轴驱动：PI3K 或 Akt 抑制，或雷帕霉素敏感的 mTOR 阻断，均可降低 Thr37/Thr46 的磷酸化水平；而组成型活性 Akt 则促进血清刺激期间靶向的相同位点的磷酸化，这使得 Thr37 磷酸化的 4E-BP1 成为 Akt 下游 mTORC1 输出的近端报告分子。在果蝇中，同源物 d4E-BP 表现出 Thr37 和 Thr46 之间保守的调控相互作用，其中胰岛素刺激的 Thr46 磷酸化（可通过磷酸化 Thr37/46 抗体检测）是将 d4E-BP 从 eIF4E 结合的翻译抑制因子转化为结合力较弱形式的主要事件；这种调控依赖于胰岛素-PI3K-Akt-TSC-TOR信号通路，因为针对Dp110（PI3K）、dAkt、dTSC1或dTOR的RNAi分别会降低或增加d4E-BP Thr37/Thr46的磷酸化水平，并以符合线性Akt→TSC→TOR→4E-BP通路的方式改变d4E-BP的亚型模式。果蝇的层级分析表明，在血清饥饿的细胞中，d4E-BP在不阻止eIF4E相互作用的位点上携带多个磷酸基团。胰岛素以雷帕霉素敏感的方式触发Thr46位点的额外磷酸化，这与酸性更强的亚型的出现和eIF4E结合的减少相一致。这在功能上反映了哺乳动物4E-BP1中Thr37/Thr46磷酸化启动的必要性，该磷酸化启动后续修饰，从而释放eIF4E并允许eIF4F组装。这些发现表明，磷酸化 4E-BP1 (Thr37) 处于一个两步机制中，其中 mTORC1 首先磷酸化 eIF4E 结合的 4E-BP1 上的 Thr37/Thr46，以产生启动中间体，然后其他激酶——仍然在 mTORC1 信号传导环境中运行——修饰 Thr70 和 Ser65，最终导致 eIF4E 结合的丧失，从抑制性翻译状态转变为允许性翻译状态，以及生长和存活相关蛋白的合成增加。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10364159/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14645523/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%