Phospho-CDC37 (Ser13) Antibody [G22K18]

目录号: F4240

抗体应用：反应性：Human, Mouse, Rat

Lane 1: 293T, Lane 2: 3T3, Lane 3: C2C12, Lane 4: PC12

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
400-668-6834 info@selleck.cn

使用信息

稀释比例
WB1:1000

抗体应用
WB

反应性
Human, Mouse, Rat

抗体类型
Rabbit Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
50 kDa

阳性对照	293 cell; NIH/3T3 cell; C2C12 cell; PC-12 cell
阴性对照

实验方法

WB
实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail, 磷酸酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail, 磷酸酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail, 磷酸酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液（建议使用 5% BSA溶液）中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail, 磷酸酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail, 磷酸酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail, 磷酸酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液（建议使用 5% BSA溶液）中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Phospho-CDC37 (Ser13) Antibody [G22K18] 仅识别 Ser13 处磷酸化的内源性 CDC37 蛋白水平。

蛋白定位
细胞质

Uniprot ID
Q16543

克隆号
G22K18

别名
Hsp90 co-chaperone Cdc37; Hsp90 chaperone protein kinase-targeting subunit; p50Cdc37; CDC37; CDC37A

背景
热休克蛋白90 (Hsp90) 是一种重要的分子伴侣，调控着众多客户蛋白（尤其是信号分子和激酶）的折叠、成熟和稳定性。其活性受到协同伴侣网络的严格调控，这些协同伴侣网络负责协调客户蛋白的募集和构象转变。其中，细胞分裂周期蛋白37 (Cdc37，也称为p50) 是一种高度特化的协同伴侣，在蛋白激酶调控中发挥着重要作用。Cdc37作为激酶特异性衔接蛋白，能够募集多种激酶至Hsp90复合物，保护它们免于降解，并使其稳定化和功能成熟。由于大多数激酶依赖于Cdc37-Hsp90复合物进行正确的折叠和激活，因此这种募集被认为是不可或缺的。Cdc37由CDC37基因编码，在功能上与细胞增殖和存活相关。在酵母中，它通过稳定有丝分裂调控所必需的关键激酶复合物来维持细胞周期进程。在哺乳动物系统中，它调节热休克蛋白90 (Hsp90) 的ATP酶活性，从而影响对有效激酶加载至关重要的构象变化。CDC37表达的缺失或抑制会导致激酶信号传导缺陷、生长停滞和细胞凋亡。相反，Cdc37表达升高会促进细胞增殖，并与致癌过程相关，尤其是在前列腺癌中，Cdc37上调会导致增生和发育不良。因此，Cdc37作为Hsp90依赖性激酶调控的关键介质，将分子伴侣活性与细胞周期调控和肿瘤发生整合在一起。

背景

热休克蛋白90 (Hsp90) 是一种重要的分子伴侣，调控着众多客户蛋白（尤其是信号分子和激酶）的折叠、成熟和稳定性。其活性受到协同伴侣网络的严格调控，这些协同伴侣网络负责协调客户蛋白的募集和构象转变。其中，细胞分裂周期蛋白37 (Cdc37，也称为p50) 是一种高度特化的协同伴侣，在蛋白激酶调控中发挥着重要作用。Cdc37作为激酶特异性衔接蛋白，能够募集多种激酶至Hsp90复合物，保护它们免于降解，并使其稳定化和功能成熟。由于大多数激酶依赖于Cdc37-Hsp90复合物进行正确的折叠和激活，因此这种募集被认为是不可或缺的。Cdc37由CDC37基因编码，在功能上与细胞增殖和存活相关。在酵母中，它通过稳定有丝分裂调控所必需的关键激酶复合物来维持细胞周期进程。在哺乳动物系统中，它调节热休克蛋白90 (Hsp90) 的ATP酶活性，从而影响对有效激酶加载至关重要的构象变化。CDC37表达的缺失或抑制会导致激酶信号传导缺陷、生长停滞和细胞凋亡。相反，Cdc37表达升高会促进细胞增殖，并与致癌过程相关，尤其是在前列腺癌中，Cdc37上调会导致增生和发育不良。因此，Cdc37作为Hsp90依赖性激酶调控的关键介质，将分子伴侣活性与细胞周期调控和肿瘤发生整合在一起。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29699578/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33846988/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

技术支持

在订购、运输、储存和使用我们的产品的任何阶段，您遇到的任何问题，均可以通过拨打我们的热线电话400-668-6834，或者技术支持邮箱tech@selleck.cn，直接联系到我们。我们会在24小时内尽快联系您。

* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%