Danoprevir
别名: ITMN-191, RG7227 中文名称：丹诺瑞韦
Danoprevir 是一种肽类抑制剂，作用于丙型肝炎病毒(HCV)的NS3/4A蛋白酶，IC50为0.2-3.5 nM，抑制HCV 1A/1B/4/5/6基因型比抑制2B/3A基因型效果高10倍左右。Phase 2。
Danoprevir Chemical Structure
CAS: 850876-88-9
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产品质控
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HCV Protease抑制剂选择性比较
生物活性
| 产品描述 | Danoprevir 是一种肽类抑制剂，作用于丙型肝炎病毒(HCV)的NS3/4A蛋白酶，IC50为0.2-3.5 nM，抑制HCV 1A/1B/4/5/6基因型比抑制2B/3A基因型效果高10倍左右。Phase 2。 | ||
|---|---|---|---|
| 特性 | Danoprevir丙型肝炎病毒(HCV)的NS3/4A蛋白酶的模拟抑制剂。 | ||
| 靶点 |
|
| 体外研究(In Vitro) | ||||
| 体外研究活性 | 0.29 nM Danoprevir抑制NS3/4A 蛋白酶, 而10 μM Danoprevir 却不能抑制一组79种蛋白酶，离子通道，转运蛋白，及细胞表面受体。Danoprevir与 NS3/4A第一次结合能维持5小时以上，且保持抑制作用状态。Danoprevir (45 nM) 消除病人肝细胞衍生的Huh7细胞衍生的HCV基因型1b复制子，EC50为1.8 nM。[1]含个体突变的HCV 亚基因组复制子细胞系, V36M, R109K, 和V170A 替换不会抗Danoprevir,但是R155K替换则高度抗 Danoprevir。[2] Danoprevir 作用于转染重组病毒的Huh7.5细胞, 显示出抗病原体抑制效果，作用于HCV基因型 1, 4,和 6时，IC50为2-3 nM, 比作用于基因型2/3/5 (280-750 nM)低100倍以上。[3] | |||
|---|---|---|---|---|
| 激酶实验 | 持续荧光反应能量转移(FRET)实验 | |||
| 实验buffer含25 μM NS4A肽, 50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 15% (vol/vol)甘油, 0.6 mM月桂基二甲基氨基氧化物, 10 mM二硫苏糖醇, 及0.5 μM 荧光素/QXL520标签的FRET底物{Ac-DE-Dap(QXL520)-EE-Abu-ψ-[COO]-AS-Cys(5-FAMsp)-NH2}. 加入50 pM K2040 酶开始反应。反应在96孔板上黑暗中进行，收集荧光数据。对照组没有抑制剂，有酶参与。分析反应的线性相位计算起始反应率，从而获得IC50值。10 nM NS3/4A 和两倍量Danoprevir 在1×实验buffer中预温育15分钟形成Danoprevir-NS3/4A复合体测定活性。随后，快速稀释复合体，稀释200倍，加到含底物的实验buffer中。对照组条件相同，但是NS3/4A和Danoprevir没有预温育，酶加入复合体反应混合物中，开始反应。此外，对照组没有或NS3。反应进行超过5小时。 | ||||
| 细胞实验 | 细胞系 | 携带HCV复制子的Huh7细胞 | ||
| 浓度 | 5 pM 到100 nM | |||
| 孵育时间 | 48小时 | |||
| 方法 | 进行抗病原体的实验，接种细胞，梯度稀释的Danoprevir加到含K2040复制子的Huh7细胞中。温育48小时后，提取细胞内 RNA,通过RT-PCR，使用引物 (5’-CACTCCCCTGTGAGGAACTACTG-3’ 和5’-AGGCTGCACGACACTCATACT-3’) 和HCV 5非翻译区的特定探针(5’-6-FAM-CTTCACGCAGAAAGCGTCTAGCCATGG-MGBNFQ-3’, FAM为6-羧基荧光素，MGBNFQ为分子槽沟，结合到非荧光猝火器上) ，且使用ABI Prism 7900 序列检测器系统测定HCV复制子RNA水平。使用TaqMan Gold RT-PCR 试剂进行单管反应。RNA 规格和样本的三次重复反应在50 μL含 5 μL细胞内 RNA (50 ng)的buffer中进行。RT在48oC下进行30分钟，随后在95oC下进行10分子。PCR反应流程如下， 95oC下进行15秒， 60oC下进行1分钟，循环40次。测定每个RNA浓度，做三次平行。根据标准曲线测定复制子RNA的绝对浓度。根据复制子水平测定EC50值。 | |||
| 体内研究(In Vivo) | ||
| 体内研究活性 | Danoprevir按30 mg/kg剂量处理鼠或猴12小时，使肝脏浓度下降，然后提高Danoprevir浓度，从细胞中消除复制子。[1] | |
|---|---|---|
| 动物实验 | Animal Models | Sprague-Dawley鼠, 食蟹猴 |
| Dosages | 30 mg/kg | |
| Administration | 口服饲喂 | |
| NCT Number | Recruitment | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
|---|---|---|---|---|---|
| NCT01714154 | Completed | Healthy Volunteer |
Hoffmann-La Roche |
November 2012 | Phase 1 |
| NCT01592318 | Completed | Healthy Volunteer |
Hoffmann-La Roche |
May 2012 | Phase 1 |
| NCT01588002 | Completed | Healthy Volunteer |
Hoffmann-La Roche |
April 2012 | Phase 1 |
| NCT01519336 | Completed | Healthy Volunteer |
Hoffmann-La Roche |
February 2012 | Phase 1 |
化学信息&溶解度
| 分子量 | 731.83 | 分子式 | C35H46FN5O9S |
| CAS号 | 850876-88-9 | SDF | Download Danoprevir SDF |
| Smiles | CC(C)(C)OC(=O)NC1CCCCCC=CC2CC2(NC(=O)C3CC(CN3C1=O)OC(=O)N4CC5=C(C4)C(=CC=C5)F)C(=O)NS(=O)(=O)C6CC6 | ||
| 储存条件(自收到货起) | |||
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体外溶解度 |
DMSO : 144 mg/mL ( (196.76 mM)； DMSO吸湿会降低化合物溶解度，请使用新开封DMSO) Ethanol : 144 mg/mL Water : Insoluble |
摩尔浓度计算器 |
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体内溶解度 现配现用，请按从左到右的顺序依次添加，澄清后再加入下一溶剂 |
动物体内配方计算器 | ||||
实验计算
动物体内配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系Selleck为您提供正确的澄清溶液配方）
计算结果：
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于μL DMSO溶液（母液浓度mg/mL，注：如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请先联系Selleck）；
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入μL ddH2O，混匀澄清。
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL Corn oil，混匀澄清。
注意：1. 首先保证母液是澄清的；
2.一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
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