Sulforhodamine B sodium salt

细胞培养中的Sulforhodamine B 比色法分析细胞增殖
1. 制备足够体积的处理溶液，在 96 孔板中重复三次（每次重复 50 μl），或在 384 孔板中重复六次（每次重复 10 μl）。 确保体积考虑到移液变化。
2. 处理溶液可以在水溶液（例如用于转染的 Opti-MEM）或合适的溶剂（例如 DMSO）中制备。
3. 从单层细胞中除去培养基，并用灭菌的 PBS 洗涤细胞一次。 添加 1 ml（适用于 100 mm 板）0.25% 胰蛋白酶，均匀覆盖细胞生长表面。
4. 37 °C 孵育 5 分钟或直至细胞开始解离。 用 10 体积含有 FBS 的培养基灭活胰蛋白酶。 上下混合以获得均匀的单细胞悬浮液。
5. 将细胞悬液转移至无菌 Falcon 管中。
6. 使用细胞悬液和 0.4% 台盼蓝溶液按 1:1 混合的血细胞计数器测定细胞浓度。 或者，在计数之前离心细胞以洗涤胰蛋白酶并重悬于生长培养基中。
7. 用生长培养基（10% FBS）调整细胞浓度，以获得适当的每孔细胞接种密度。
8. 混合处理溶液并将 50 μl（96 孔格式）或 10 μl（384 孔格式）分配到每个孔中。
9. 充分混合细胞悬液，并向每个含有处理溶液的孔中添加 50 μl（96 孔格式）或 10 μl（384 孔格式）。
注意：确保细胞均匀分布在孔底，避免摇动以防止“环效应”。
10. 留出三个孔用于未处理或载体对照，三个孔用于背景扣除，并在 37°C、5% CO2 下孵育板，直至准备好读数。
11. 将 25 μl（96 孔格式）或 5 μl（384 孔格式）冷 50% TCA 直接添加到培养基上清液中。 将板在 4 °C 下孵育 1 小时，无需混合。
12. 将板浸入缓慢流动的自来水中，然后将多余的水拍到纸巾上，从而清洗板四次。 让板在室温下风干。
13. 在每个孔中添加 50 μl（96 孔格式）或 20 μl（384 孔格式）0.04% SRB 溶液。
14. 室温孵育 1 小时，然后用 1% 乙酸冲洗板四次（96 孔板为 200 μl，384 孔板为 30 μl）。 让板在室温下风干。
15. 将 50 μl 至 100 μl 10 mM tris 碱溶液 (pH 10.5) 添加到每个孔中，并在定轨摇床上摇动板 10 分钟以溶解蛋白质结合染料。
16. 在酶标仪中测量 510 nm 处的吸光度。