JIB-04
For research use only. Not for use in humans.
目录号:S7281 别名: NSC 693627

CAS No. 199596-05-9
JIB-04 (NSC 693627)是一种广谱的选择性Jumonji histone demethylase抑制剂,无细胞试验中对JARID1A,JMJD2E,JMJD3,JMJD2A,JMJD2B,JMJD2C和JMJD2D的IC50分别是230 nM,340 nM,855 nM,445 nM,435 nM,1100 nM和290 nM。JIB‑04还可诱导细胞凋亡。
产品安全说明书
Histone Demethylase抑制剂选择性比较
生物活性
产品描述 | JIB-04 (NSC 693627)是一种广谱的选择性Jumonji histone demethylase抑制剂,无细胞试验中对JARID1A,JMJD2E,JMJD3,JMJD2A,JMJD2B,JMJD2C和JMJD2D的IC50分别是230 nM,340 nM,855 nM,445 nM,435 nM,1100 nM和290 nM。JIB‑04还可诱导细胞凋亡。 | ||||||||||||
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靶点 |
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体外研究 |
JIB-04 以癌症选择性的方式引起转录改变,包括下调增殖基因,上调抗增殖/前凋亡基因。JIB-04能够以IC50低至10 nM的水平阻碍肺癌、前列腺癌细胞系的增殖,同时在HBECs和PrSCs/PrECs中产生较少的抗增殖活性。[1] |
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Assay |
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体内研究 | 在两个小鼠异种移植模型(H358或A549)中,JIB-04减少肿瘤生长,降低肿瘤中Jumonji组蛋白脱甲基酶的活性,延长肿瘤患者生存时间。[1] |
推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)
激酶实验: |
- 合并
Jumonji脱甲基酶/脯氨酰羟化酶/LSD1活性检测: 活性JMJD2E氨基酸1-350从E.coli中纯化,体外环境中与α-酮戊二酸,5-10 μM铁离子,抗坏血酸,组蛋白肽段基质一起使用,偶联反应时加入甲醛脱氢酶和NAD+来定量NADH的生成量,或使用Epigentek kit P-3081。组蛋白脱甲基反应结果通过Western分析来定量,构建His-tagged hJMJ2D氨基酸1-350表达体系,E.coli表达产物通过Qiagen Ni-NTA琼脂糖手册进行纯化。蛋白用50 mM TrisHCl pH 7.8+0.3 M NaCl + 10%甘油+200 mM immidazol洗脱,后用20 mM TrisHCl pH 7.4,0.15 M NaCl,0.2 mM PMSF,0.5 mM DTT,8%甘油透析。蛋白分装,速冻、储存在-80°C。Western blot中,~1.5 μg酶与0.3 μg H3K9me3基质(Active Motif #31213),10 μM (NH4)2Fe(SO4)2,1 mM α-酮戊二酸,2 mM L-抗坏血酸钠在50 mM pH 7.9溶液中混合,与溶媒或药物在37°C孵育30min-2hrs。加入SDS loading buffer后,煮沸,样品在NuPage 4-12% Bis-Tris胶上电泳,转膜,用Upstate #07-523处理硝化纤维素膜以检测H3K9me3。H3总信号是通过Active Motif #39763和连接IRDye 680的驴抗兔IgG(二抗, LI-COR # 926-32223),在Odyssey Infrared成像系统中获取图像。体外IC50检测和竞争性试验,100-200 ng纯化蛋白与溶媒、JIB-04或类似物共孵育,通过ELISA(H3K9me3去甲基作用:Epigentek kit P-3081,H3K4me3去甲基作用:P-3083,H3K27me3去甲基作用:P-3085)检测活性,反应液包含50mM Hepes pH 7.5,0.01% Tween 20,120nM (NH4)2Fe(SO4)2,1 mMα-酮戊二酸,2 mM L-抗坏血酸钠,50ng肽段基质。最终酶浓度分别为:206 nM JMJD2A,12 nM JMJD2B,60 nM JMJD2C,90 nM JMJD2D E.coli,30 nM JMJD2D Sf9,30 nM JMJD2E,30 nM Jarid1a,35 nM JMJD3。E.coli表达的hJMJD2A(氨基酸1-350)纯化后以每孔400 ng的量进行检测。通过GraphPad Prism软件计算IC50和进行曲线拟合。需要注意的是在基质竞争性试验中, 应该使分析处于线性范围并且不超出ELISA板的结合能力。细胞裂解物的H3K9me3脱甲基酶活性的直接测定:超声处理细胞(细胞接种浓度为2x10E+06/10cm板)或肿瘤PBS匀浆(3x4 sec),等量的蛋白与组蛋白H3K9me3基质在反应液中37°C孵育2h后,用Epigentek kit P-3081进行免疫检测。500 ng E.coli表达的PHD2纯化蛋白,溶于40mM Tris pH 7.4,100mM NaCl,20% glycerol,5mM β-mercapto-ethanol,10mM 麦芽糖备用。从HIF-1 ODD分离出的生物素化的肽段固定在亲和素包裹的96孔板中。酶与被试药物在反应液(20 mM Tris-Cl pH 7.5,5 mM KCl,1.5 mM MgCl2,2 mM DTT,0.12 μM硫酸亚铁,0.5 mM戊邻酮二酸盐,1 mM抗坏血酸)中室温孵育45min。α-酮戊二酸的竞争性类似物DMOG作为抑制作用的阳性对照。肽段羟基化是通过对羟基化HIF肽表位使用多克隆兔抗体,再加入连接羊抗兔HPR的二抗。EnVision上读取发光值。LSD1重组蛋白活性通过使用Epigentek kit P-3075检测。 |
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细胞实验: |
- 合并
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动物实验: |
- 合并
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溶解度 (25°C)
体外 | DMSO | 25 mg/mL warmed (80.96 mM) |
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Water | Insoluble | |
Ethanol | Insoluble | |
体内 |
从左到右依次将纯溶剂加入产品,现配现用(数据来自Selleck实验检测而非文献): 4% DMSO+corn oil |
3mg/mL |
* 溶解度检测是由Selleck技术部门检测的,可能会和文献中提供的溶解度有所差异,这是由于生产工艺和批次不同产生的正常现象。请按照顺序依次加入各个纯溶剂。
化学数据
分子量 | 308.76 |
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化学式 | C17H13ClN4 |
CAS号 | 199596-05-9 |
储存条件 |
粉状 溶于溶剂 |
别名 | NSC 693627 |
动物体内配方计算器 (澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量) | ||||||||||
给药剂量 | mg/kg | 动物平均体重 | g | 每只动物给药体积 | ul | 动物数量 | 只 | |||
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系Selleck为您提供正确的澄清溶液配方) | ||||||||||
% DMSO % % Tween 80 % ddH2O | ||||||||||
计算重置 |
计算结果:
工作液浓度: mg/ml;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL,
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的;
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
计算器
摩尔浓度计算器
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (mg) = 浓度 (mM) x 体积 (mL) x 分子量 (g/mol)
摩尔浓度计算公式
*在配置溶液时,请务必参考Selleck产品标签上、MSDS / COA(可在Selleck的产品页面获得)批次特异的分子量使用本工具。
稀释计算器
用本工具协助配置特定浓度的溶液,使用的计算公式为:
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式
稀释公式一般简略地表示为: C1V1 = C2V2 ( 输入 输出 )
在配置溶液时,请务必参考Selleck产品标签上、MSDS / COA(可在Selleck的产品页面获得)批次特异的分子量使用本工具。.
分子量计算器
通过输入化合物的化学式来计算其分子量:
注:化学分子式大小写敏感。C10H16N2O2 c10h16n2o2
摩尔浓度计算器
技术支持
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如果有其他问题,请给我们留言。
常见问题及建议解决方法
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问题 1:
Do you have any suggestion for in vivo study please? (Cat. S7281, via injection)
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回答:
For IP or sub cutaneous injection, The compound is soluble in 4% DMSO+30% PEG 300+5% Tween 80+ddH2O at 3 mg/ml. But when water added, it turned yellowish green immediately. We are not sure if the compound was still fine in this vehicle. So we tried to use oil. 3mg of this compound dissolves in 40ul of DMSO clearly, and it can be dilute with corn oil at any proportion.