PF-5274857
PF-5274857是一种有效的，选择性Smoothened(Smo)拮抗剂，抑制Hedgehog (Hh)信号通路，IC50和Ki分别为5.8 nM和4.6 nM，可以穿透血脑屏障。
PF-5274857 Chemical Structure
CAS: 1373615-35-0
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Hedgehog/Smoothened抑制剂选择性比较
生物活性
| 产品描述 | PF-5274857是一种有效的，选择性Smoothened(Smo)拮抗剂，抑制Hedgehog (Hh)信号通路，IC50和Ki分别为5.8 nM和4.6 nM，可以穿透血脑屏障。 | ||||
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| 特性 | PF-5274857对于治疗某些肿瘤具有非常好的潜在临床应用价值，如 脑瘤以及活化的Hh通路驱动的脑转移瘤。 | ||||
| 靶点 |
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| 体外研究(In Vitro) | ||||
| 体外研究活性 | PF-5274857的Ki为4.6 nM. PF-5274857可以完全抑制 Shh诱导的Hh通路活性，通过在MEF细胞中测量Smo下游基因 Gli1 的转录活性可知IC50为2.7nM。PF-5274857可以结合 Smo，IC50 为 5.8 nM. PF-5274857对μ-阿片受体可以微弱抑制，在随后的一项功能分析中测得解离常数为36μM [1] | |||
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| 激酶实验 | 生化分析 | |||
| 过表达人源Smo (氨基酸181-787)的HEK293细胞培养在含有10% FBS, Pen–Strep以及 0.1 mg/mL 潮霉素的DMEM培养基中，直到90%密度。用冷的PBS洗过之后, 将细胞用膜制备缓冲液重悬均匀，缓冲液成分包含50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 250 mM 蔗糖含有Roche完全蛋白酶鸡尾酒。将上述匀浆离心并用分析缓冲液重悬细胞，分析缓冲液包含50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 100 mM NaCl, 25 mM MgCl2, 1 mM EDTA, 和0.1%无蛋白酶BSA,然后在玻璃组织研磨机中使之均匀。含有Smo的总蛋白利用Pierce BCA蛋白分析法来测定。对于竞争性结合实验分析，加入100 μL 分析缓冲液到96孔GF/B 滤板，进行10分钟的滤板预湿润然后去掉。然后加入20 μL 分析缓冲液, 10μL药物的连续稀释液, 20 μL 3H-Smo 拮抗剂 (终浓度3 nM)和50 μL 膜制备品(含有40 μg 总蛋白)。滤板在室温孵育2小时，洗过之后真空晾干。然后滤板在60°C 烘箱中干燥1小时，加入 45 μL Microscint 20，室温孵育30 分钟到1小时, 然后用TopCount闪烁记数器计数。数据用GraphPad Prism软件进行分析。 | ||||
| 细胞实验 | 细胞系 | Gli-Luc/MEF 细胞 | ||
| 浓度 | 50 pM- 3 μM | |||
| 孵育时间 | 48 小时 | |||
| 方法 | Gli-Luc/MEF细胞培养在含有10%热失活FBS, 2mM l-glutamine和0.55 mM β-mercaptoethanol 的DMEM培养基中直到90%细胞密度。第一天, 胰酶消化后的细胞按每孔7,500个接种在白色384孔板中，每孔加入20 μL含有1% 热失活FBS和1 mM 丙酮酸钠的OptiMEM 培养基。平板在37°C和5% CO2环境中培养过夜。第2天, 加入3 μM到50pM的PF-5274857 ，按照3倍连续稀释，然后加入重组鼠源Sonic Hedgehog，终浓度2μg/mL。在37°C，5% CO2条件下细胞与PF-5274857和Shh孵育48小时。第四天利用Bright-Glo 荧光素酶分析系统进行荧光素酶分析。简言之, 每孔培养基中加入25 μL Bright-Glo荧光素酶试剂。室温孵育5分钟然后酶标仪检测数据然后计算PF-5274857的IC50值。 | |||
| 体内研究(In Vivo) | ||
| 体内研究活性 | PF-5274857具有明显的肿瘤生长抑制作用，这用抑制具有剂量依赖特性并能在高剂量(≥10 mg/kg)治疗6天后诱导肿瘤退化。在肿瘤组织中PF-5274857不同程度地下调Gli1, Gli2, Ptch1和 Ptch2基因的表达水平，用药后6到12小时达到最好效果，然而PF-5274857 对Smo表达水平没有影响。在皮肤组织中，PF-5274857在相似的时间进程中下调Gli1和Gli2表达。在Ptch+/−p53+/−髓母细胞瘤同种异体移植小鼠模型中得到的PF-5274857对肿瘤Gli1 mRNA生产率抑制的IC50为 8.9 nM ，相当于血浆中药物在这一浓度下处理6天后肿瘤生长抑制达到119%。在Ptch+/−p53−/− 髓母细胞瘤同种异体移植小鼠模型中IC50值预计为 3.5 nM, 与Ptch+/−p53+/−模型结果一致[1] 。 | |
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| 动物实验 | Animal Models | 携带原发性Ptch+/−p53+/−或Ptch+/−p53−/−髓母细胞瘤肿瘤的 SCID-beige 小鼠 |
| Dosages | 0 mg/kg, 1 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg和30 mg/kg | |
| Administration | 口服 | |
化学信息&溶解度
| 分子量 | 436.96 | 分子式 | C20H25ClN4O3S |
| CAS号 | 1373615-35-0 | SDF | Download PF-5274857 SDF |
| Smiles | CC1=CC(=C(N=C1)C2=CC(=NC=C2Cl)N3CCN(CC3)C(=O)CCS(=O)(=O)C)C | ||
| 储存条件(自收到货起) | |||
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体外溶解度 |
DMSO : 93 mg/mL ( (212.83 mM)； DMSO吸湿会降低化合物溶解度，请使用新开封DMSO) Water : 93 mg/mL Ethanol : Insoluble |
摩尔浓度计算器 |
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体内溶解度 现配现用，请按从左到右的顺序依次添加，澄清后再加入下一溶剂 |
动物体内配方计算器 | ||||
实验计算
动物体内配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系Selleck为您提供正确的澄清溶液配方）
计算结果：
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于μL DMSO溶液（母液浓度mg/mL，注：如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请先联系Selleck）；
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入μL ddH2O，混匀澄清。
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL Corn oil，混匀澄清。
注意：1. 首先保证母液是澄清的；
2.一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
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