WAY-600

目录号:S2689

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WAY-600是一种有效的,ATP竞争性的,选择性的mTOR抑制剂,IC50为9 nM;抑制mTORC1/P-S6K(T389)和mTORC2/P-AKT(S473),但不抑制P-AKT(T308);作用于mTOR比作用于PI3Kα(>100倍)和PI3Kγ(>500倍)选择性高。

WAY-600 Chemical Structure

CAS: 1062159-35-6

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mTOR抑制剂选择性比较

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生物活性

产品描述 WAY-600是一种有效的,ATP竞争性的,选择性的mTOR抑制剂,IC50为9 nM;抑制mTORC1/P-S6K(T389)和mTORC2/P-AKT(S473),但不抑制P-AKT(T308);作用于mTOR比作用于PI3Kα(>100倍)和PI3Kγ(>500倍)选择性高。
靶点
mTOR [1]
9 nM
体外研究

免疫复合物激酶试验表明mTORC2-特异性底物His6-AKT或mTORC1底物His6-S6K被WAY-600剂量依赖性抑制。在细胞模型中,WAY-600剂量依赖性完全抑制mTOR信号和AKT功能。在MDA361,人乳腺癌细胞中,WAY-600显著抑制cap-依赖性和总体蛋白质合成。WAY-600在各种癌细胞系中表现出抗增殖活性,包括G1细胞周期阻滞和选择性细胞凋亡。在U87MG,MDA361 和LNCap 细胞中,WAY-600下调血管生成因子,VEGF和HIF-1α。[1]

推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)

激酶实验:[1]
  • 纯化的 FLAG-TOR 的 DELFIA 测定:

    纯化FLAG-TOR (FL和3.5)的常规试验在96孔板中如下进行。酶先在激酶缓冲液(10 mM Hepes (pH 7.4),50 mM NaCl,50 mM β-甘油磷酸盐,10 mM MnCl2,0.5 mM DTT,0.25 lM 微囊藻素LR,和100 lg/mL BSA)中稀释。对每个孔,12 μL稀释的酶与0.5 μL测试抑制剂或对照组载体二甲基亚砜(DMSO)简单混合。激酶反应通过加入包含ATP和His6-S6K 的12.5 μL激酶试验缓冲液起始,终反应体积为25 μL,包含800 ng/mL FLAG-TOR,100 μM ATP,和1.25 μM His6-S6K。反应板在室温下温和振荡培育2小时(在1–6 小时为线性),随后加入25 μL停止缓冲液(20 mM Hepes (pH 7.4),20 mM EDTA,和20 mM EGTA)终止反应。磷酸化(Thr-389) His6-S6K的DELFIA检测在室温下使用铕-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu每个抗体)标记的单克隆抗- P(T389)-p70S6K抗体(1A5)进行。45μl终止的激酶反应混合物转移到包含55 μL PBS的MaxiSorp板。将孔抽吸并用PBS洗涤一次后,His6-S6K附着2小时。加入100μL DELFIA缓冲液与40 ng/mL Eu-P(T389)-S6K抗体。抗体结合在温和搅拌下继续1小时。随后将孔抽吸,并用包含0.05% Tween 20 (PBST)的PBS洗涤4次。将100μL DELFIA增强液加入每孔,板在PerkinElmer Victor模型酶标仪上读取。获得的数据用于计算酶活性和潜在抑制剂对酶的抑制作用。

细胞实验:[1]
  • Cell lines: MDA361,U87MG,HCT116,LNCap 和 HT29 细胞
  • Concentrations: 0-100 μM
  • Incubation Time: 24 或 48 小时
  • Method: 对于细胞周期分析,将细胞以10,000细胞/孔的密度接种于96孔板,培养24小时,用不同抑制剂处理24小时或48小时。处理后,采集细胞,用PBS洗涤,并于-20 °C在70%乙醇中固定过夜。洗涤细胞,用碘化丙啶着色,并根据Guava细胞周期方案在Guava PCA-96仪器上分析细胞周期构成(得到5000 细胞/孔)。

溶解度(25°C)

体外

* 溶解度检测是由Selleck技术部门检测的,可能会和文献中提供的溶解度有所差异,这是由于生产工艺和批次不同产生的正常现象。请按照顺序依次加入各个纯溶剂。

化学数据

分子量 494.59
化学式

C28H30N8O

CAS号 1062159-35-6
储存条件 3年 -20°C 粉状
2年 -80°C 溶于溶剂

动物体内配方计算器(澄清溶液)

第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)

mg/kg g μL

第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系Selleck为您提供正确的澄清溶液配方)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

计算结果:

工作液浓度: mg/ml;

DMSO母液配制方法: mg 药物溶于μL DMSO溶液(母液浓度mg/mL,:如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请先联系Selleck);

体内配方配制方法:μL DMSO母液,加入μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入μL ddH2O,混匀澄清。

体内配方配制方法:μL DMSO母液,加入μL Corn oil,混匀澄清。

注意:1. 首先保证母液是澄清的;
2.一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。

摩尔浓度计算器

质量 浓度 体积 分子量

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操作手册

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