ZSTK474
ZSTK474抑制I型PI3K亚型，在无细胞试验中IC50为37 nM，对PI3Kδ作用最显著。Phase 1/2。
ZSTK474 Chemical Structure
CAS: 475110-96-4
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细胞实验数据示例
| 细胞系 | 实验类型 | 给药浓度 | 孵育时间 | 活性描述 | 文献信息 |
|---|---|---|---|---|---|
| human A549 cells | Function assay | 10 μM | 1 h | Inhibition of PI3K in human A549 cells assessed as reduction in pAkt level at 10 uM after 1 hr by Western blotting analysis | 25766633 |
| Sf21 insect cells | Function assay | 1 h | Inhibition of bovine recombinant PI3K p110delta expressed in Sf21 insect cells using phosphatidylinositol as substrate after 1 hr by phosphoimaging, IC50=0.7 nM | 21882832 | |
| human HCT116 cells | Function assay | 15 mins | Inhibition of PIK3CA H1047R mutant-mediated cell signaling in human HCT116 cells expressing PTEN assessed as inhibition of insulin-induced pAkt/PKB phosphorylation at Thr308 treated for 15 mins before insulin challenge measured after 5 mins by immunoblotting, IC50=78 nM | 21882832 | |
| human LNCAP cells | Proliferation assay | 3 days | Antiproliferative activity against human LNCAP cells after 3 days by MTS assay, IC50=0.21 μM | 20227881 | |
| human NZB5 cells | Proliferation assay | 5 days | Antiproliferative activity against human NZB5 cells expressing wild type p110alpha assessed as incorporation of [3H]thymidine after 5 days, IC50=0.22 μM | 21882832 | |
| human NZOV9 cells | Proliferation assay | 5 days | Antiproliferative activity against human NZOV9 cells expressing p110alpha kinase Y1021C mutant assessed as incorporation of [3H]thymidine after 5 days, IC50=0.29 μM | 21882832 | |
| human MDA-MB-468 cells | Cytotoxic assay | 48 h | Cytotoxicity against PTEN-deficient human MDA-MB-468 cells assessed as inhibition of cell growth after 48 hrs by Cell Titer 96 assay | 23795239 | |
| human DMS114 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human DMS114 cells | 22336246 | ||
| human MKN74 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human MKN74 cells | 22336246 | ||
| human SNB78 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human SNB78 cells | 22336246 | ||
| human St-4 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human St-4 cells | 22336246 | ||
| human DU145 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human DU145 cells | 22336246 | ||
| human LOXIMVI cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human LOXIMVI cells | 22336246 | ||
| human PC3 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human PC3 cells | 22336246 | ||
| human LOXIMVI cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human LOXIMVI cells | 22336246 | ||
| human OVCAR3 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human OVCAR3 cells | 22336246 | ||
| human SKOV3 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human SKOV3 cells | 22336246 | ||
| human KM12 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human KM12 cells | 22336246 | ||
| human HT-29 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human HT-29 cells | 22336246 | ||
| human HCT15 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human HCT15 cells | 22336246 | ||
| human NCI-H226 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human NCI-H226 cells | 22336246 | ||
| human NCI-H522 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human NCI-H522 cells | 22336246 | ||
| human A549 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human A549 cells | 22336246 | ||
| human HCC2998 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human HCC2998 cells | 22336246 | ||
| human SNB75 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human SNB75 cells | 22336246 | ||
| human OVCAR4 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human OVCAR4 cells | 22336246 | ||
| human OVCAR5 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human OVCAR5 cells | 22336246 | ||
| human OVCAR8 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human OVCAR8 cells | 22336246 | ||
| human SKOV3 cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human SKOV3 cells | 22336246 | ||
| human ACHN cells | Growth inhibition assay | Growth inhibition of human ACHN cells | 22336246 | ||
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生物活性
| 产品描述 | ZSTK474抑制I型PI3K亚型，在无细胞试验中IC50为37 nM，对PI3Kδ作用最显著。Phase 1/2。 | ||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 特性 | 首个用于体内的口服给药的PI3K抑制剂。 | ||||||||||
| 靶点 |
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| 体外研究(In Vitro) | ||||
| 体外研究活性 | ZSTK474在1 μM浓度下有效将PI3K活性降低为对照组水平的4.7%，而LY2194002仅将其活性降低为对照组的44.6%。ZSTK474抑制重组p110β，-γ，和 -δ活性，IC50 分别为17 nM，53 nM，和6 nM。ZSTK474对一组39个人类癌细胞系表现出有效的抗增殖活性，平均GI50为0.32 μM，比平均GI50 分别为7.4 μM和10 μM的LY294002与wortmannin更有效。1 μM ZSTK474治疗阻断小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)中血小板源生长因子诱导的胞膜边缘波动和PIP3产生。10 μM ZSTK474诱导OVCAR3细胞凋亡，并诱导细胞周期完全的G1期阻滞，但是不引起A549细胞凋亡。0.5 μM ZSTK474治疗显著减少磷酸化的Akt 和GSK-3β水平，以及细胞周期蛋白D1蛋白质的表达。ZSTK474也会剂量依赖性抑制其他参与细胞增殖调节的下游信号组分，包括FKHRL1，FKHR，TSC-2，mTOR，和p70S6K的磷酸化。[1] ZSTK474在0.1 μM下不抑制mTOR，甚至在100 μM浓度下，ZSTK474仅抑制少于40%的mTOR活性。[2] ZSTK474阻断人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中VEGF诱导的细胞迁移和管腔形成，并且抑制RXF-631L细胞中HIF-1α表达与VEGF分泌，表现出有效的体外抗血管生成活性。[3] ZSTK474治疗抑制伴刀豆球蛋白A激活的T细胞中IFNγ 和IL-17的产生，并通过成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)抑制增殖和PGE(2)产生。[6] | |||
|---|---|---|---|---|
| 激酶实验 | PI3K活性抑制 | |||
| A549细胞在包含20 mM Tris-HCl (pH 7.5)，150 mM NaCl，5 mM EDTA，和1% Igepal CA-630的缓冲液中裂解，裂解物在4℃下以20,000 g裂解10分钟，上层清液用作细胞裂解物(蛋白质= 2-4 mg/mL)。为免疫沉淀PI3K，200 μL细胞裂解物与抗p85多克隆抗体和蛋白G琼脂糖(5 μL)共培养。PI3Kα，PI3Kβ，和PI3Kδ能够被抗p85多克隆抗体免疫沉淀。包含免疫沉淀物的琼脂糖小球用缓冲液A(pH 7.5的20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，5 mM EDTA，和1% Igepal CA-630)清洗两次，用缓冲液B (500 mM LiCl 和100 mM Tris-HCl，pH 7.5)清洗一次，蒸馏水清洗一次，缓冲液C(100 mM NaCl和20 mM Tris-HCl，pH 7.5)清洗一次。免疫沉淀物悬浮在20 μL包含200 μg/mL磷脂酰肌醇的缓冲液C中。混合物与逐渐增加浓度的ZSTK474在25 °C下预培养5分钟。加入[γ-32P]ATP (2 μCi每个试验混合物；终浓度，20 μM) 和MgCl2 (终浓度，20 mM)起始反应。反应混合物在25 °C下培养20分钟。磷脂酰肌醇的磷酸化产物通过薄层色谱法分离，并通过放射自显影法可视化。将磷脂酰肌醇-3-磷酸盐区域从板上刮下，放射性使用液体闪烁光谱法测量。ZSTK474的抑制水平以每分钟计数所得的不包含ZSTK474的32P百分比确定。 | ||||
| 细胞实验 | 细胞系 | MCF-7，HT-29，HCT-116，OVCAR3，A549，等 | ||
| 浓度 | 在DMSO中溶解，终浓度为~10 μM | |||
| 孵育时间 | 48小时 | |||
| 方法 | 细胞在逐渐增加浓度的ZSTK474下暴露48小时。细胞增殖的抑制使用磺酰罗丹明B测定法通过测量总细胞蛋白的改变进行评估。细胞凋亡使用流式细胞术通过染色质凝聚测定。对于染色质凝聚试验，细胞用Hoechst 33342着色，并通过荧光显微法检查。ZSTK474诱导的形态学改变，比如染色质的凝聚，表明了细胞凋亡。对于流式细胞术分析，采集细胞，用冰浴PBS清洗，并固定在70%乙醇中。然后细胞再次用冰浴PBS清洗，用RNase A (500 μg/mL)在37 °C下处理1小时，并用碘化丙啶(25 μg/mL)着色。细胞的DNA含量使用流式细胞仪分析。 | |||
| 实验图片 | 检测方法 | 检测指标 | 实验图片 | PMID |
| Western blot | p-PDK1 / p-GSK3β / p-AKT / AKT P-gp / MRP1 p-Rb / p27 / Cyclin D1 HIF-1α / HIF-1β |
|
28388564 | |
| Growth inhibition assay | Cell viability |
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28388564 | |
| 体内研究(In Vivo) | ||
| 体内研究活性 | ZSTK474口服给药，剂量依赖性抑制皮下植入的小鼠B16F10黑色素瘤的生长，在第14天，100，200，或400 mg/kg的剂量分别产生28.5%，7.1%，或4.9%的肿瘤消退，效果优于其他四种主要的抗癌药irinotecan，cisplatin，doxorubicin，和5-fluorouracil，其使肿瘤消退的各自最大耐受剂量分别为96%，35.7%，24%，或 68.3%。400 mg/kg ZSTK474治疗完全抑制小鼠体内A549，PC-3，和WiDr的生长，并诱导A549移植瘤的消退。[1] ZSTK474显著抑制RXF-631L异种移植模型中的肿瘤生长，与 ZSTK474处理的小鼠体内微脉管数量显著减少相一致。[3]在大鼠体内，ZSTK474口服给药改善佐剂性关节炎的发展。[6] | |
|---|---|---|
| 动物实验 | Animal Models | 皮下注射B16F10细胞的雄性 BDF1小鼠，皮下接种A549，PC-3，或 WiDr 细胞的雌性 BALB/c 裸鼠 |
| Dosages | ~400 mg/kg/day | |
| Administration | 口服 | |
化学信息&溶解度
| 分子量 | 417.41 | 分子式 | C19H21F2N7O2 |
| CAS号 | 475110-96-4 | SDF | Download ZSTK474 SDF |
| Smiles | C1COCCN1C2=NC(=NC(=N2)N3C4=CC=CC=C4N=C3C(F)F)N5CCOCC5 | ||
| 储存条件(自收到货起) | |||
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体外溶解度 |
DMSO : 15 mg/mL ( (35.93 mM)； DMSO吸湿会降低化合物溶解度，请使用新开封DMSO) Water : Insoluble Ethanol : Insoluble |
摩尔浓度计算器 |
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体内溶解度 现配现用，请按从左到右的顺序依次添加，澄清后再加入下一溶剂 |
动物体内配方计算器 | ||||
实验计算
动物体内配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系Selleck为您提供正确的澄清溶液配方）
计算结果：
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于μL DMSO溶液（母液浓度mg/mL，注：如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请先联系Selleck）；
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入μL ddH2O，混匀澄清。
体内配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL Corn oil，混匀澄清。
注意：1. 首先保证母液是澄清的；
2.一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
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